Анализ на сифилис: что такое рпга и рмп? Полная интерпретация анализов на сифилис Как понять анализ рпга количественный 1 80.

Возможно, Вам дали направление в лабораторию на анализ РПГА, но Вы не очень понимаете, что означает эта аббревиатура. Что это такое и насколько все серьезно Вы подробно узнаете из данной статьи.

Помимо пациентов с выраженными симптомами венерических заболеваний, направление на РПГА анализ могут дать людям, проходящим медицинское обследование с целью устройства на работу, перед проведением хирургической операции, или при становлении женщины на учет по беременности. Здесь нет ничего страшного и зазорного, просто, таким образом, специалисты анализируют население на предмет серьезных половых заболеваний, что позволяет своевременно выявить носителей инфекции и оказать им должную медицинскую помощь еще до развития осложнений.

Если Вы практикуете незащищенный секс (независимо от того, как хорошо Вы знакомы с сексуальным партнером, ведь многие люди сами не подозревают о своем заражении), либо подозреваете своего постоянного партнера, Вы можете спокойно сдать кровь и в скором времени узнать результат и развеять страх от неизвестности. Чтобы получить направление на лабораторный анализ не обязательно идти к венерологу. Достаточно обратиться с этой просьбой к своему терапевту, либо рассказать о беспокоящих подозрениях гинекологу или урологу.

Расшифровка анализа

РПГА расшифровывается, как реакция пассивной гемагглютинации. Знать ее значение необходимо при определении наличия возбудителя тяжелого венерического заболевания - сифилиса. Если человеческий организм поддался заражению, по результатам анализа крови это можно точно выявить.

В ходе исследования специалист может обнаружить агглютинацию эритроцитов, означающую, что красные кровяные клетки начали склеиваться между собой и выпадать в осадок под каким-то негативным воздействием. В данном случае это бледная трепонема, обитающая на верхних слоях, и провоцирующая поражение организма сифилисом.

Механизм заражения достаточно прост:

Есть здоровый организм;
В него попадает патогенный микроорганизм - бледная трепонема;
Развивается иммунный ответ;
Это в свою очередь провоцирует выработку антител, которые и являются признаком имеющейся венерической болезни.

Для анализа крови на РПГА характерно два вида антител, указывающих на наличие или отсутствие возбудителя сифилиса:

Неспецифический и нетрепонемный;
Специфический и трепонемный.

Данная методика исследования была впервые применена в 1965-ом году. С тех пор она активно используется для диагностики сифилиса. Ее высокая чувствительность позволяет не только обнаружить патоген, но и определить стадию, на которой протекает заболевание.

Известно четыре формы поражения сифилисом:

Первичная;
Вторичная;
Третичная;
Латентная.

При развивающихся аутоиммунных патологиях, на фоне некоторых вирусных заболеваний, в организме больного может возрасти количество неспецифических антител, которые воспримутся анализом РПГА, как ложная реакция.

РПГА анализ крови показан всем пациентам, у которых были жалобы, схожие на признаки сифилиса, либо когда врач подозревает нечто подобное благодаря своему большому практикующему опыту.

Также очень важно проходить подобное обследование некоторым представительницам женского пола, которые планируют в скором времени забеременеть. Потому что в их случае нужно пролечиться, а после только думать о рождение ребенка, если, конечно, им важно его здоровье.

Этот анализ нередко входит в группу обязательных тестов перед оперативным вмешательством. Благодаря полной диагностике организма можно спланировать ход операции, и ее благоприятный исход.

Как сдавать этот анализ

Вы наверное понимаете, насколько серьезный диагноз может быть поставлен по результатам РПГА анализа.

Иногда заключение бывает ошибочным по причине некачественной подготовки пациента к исследованию, отчего ложноположительный ответ становится поводом для назначения бесполезного или наоборот, вредящего лечения.

Чтобы не допустить искажение результатов теста достаточно следовать нижеперечисленным рекомендациям:

Никакой пищи накануне сдачи крови на РПГА употреблять нельзя. Этот анализ, как и большинство других, производится строго натощак;
Любые напитки, кроме простой чистой воды также не должны попасть в организм в день, отведенный под анализ. Если будете пить разрешенную жидкость, то ее объем должен быть минимальным, чтобы он никак не повлиял на состав крови;
Обычно, чтобы человек не морился голодом и жаждой, забор крови происходит в утренние часы;
В это же утро лучше вовсе не курить. Вещества, содержащиеся в дыму и парах, могут дать негативную реакцию, из-за чего результаты будут неверно расшифрованы лаборантом;
Запрет возлагается также и на алкоголь. Причем пить спиртное лучше прекратить еще за несколько дней до исследования.

Придя в специальный кабинет, пациент должен оголить свою руку от одежды, чтобы медсестра смогла взять кровь из вены. Процедура эта известна практически всем. Она относительно безболезненна и быстра. По ее окончанию Вам скажут, когда результаты анализа РПГА будут готовы, чтобы их можно было забрать.

Грамотно проведенный анализ крови помогает обнаружить возбудителей различных сложных заболеваний в организме на ранних стадиях их развития, а порой даже до проявления клинических симптомов болезни. Очень часто врачи назначают пациентам проведение анализа на реакцию агглютинации. Дальше мы разберемся с тем, что это — РПГА анализ крови, когда он применяется и о чем может поведать?

Принцип действия

Реакция непрямой гемагглютинации (называемая также реакцией пассивной гемагглютинации он же РПГА, РНГА) происходит в случае, когда на адсорбировавшие антиген эритроциты воздействуют иммунной сывороткой, которая соответствует данному антигену.

Исследованиями доказано, что по специфичности и чувствительности данный метод значительно превосходит остальные серологические анализы. Поэтому ее часто используют для выявления заболеваний, вызванных бактериями или риккетсиями. В качестве антигенов для такого анализа могут выступать бактериальные экстракты, очищенные антигены различных микробов, компоненты бактериальных вакцин.

После попадания болезнетворной бактерии в организм человека, в нем начинают продуцироваться специфические и неспецифические антитела, формируя определенный иммунный ответ. В случае с сифилисом, возбудителем которого считается бледная трепонема, принадлежащая к грамотрицательным спирохетам, в крови человека вырабатываются нетрепонемные или трепонемные антитела. На их выявлении основаны лабораторные диагностические исследования, которые должны подтвердить или опровергнуть наличие возбудителя вируса в организме.

При РПГА эритроциты, поверхность которых адсорбировала антигены бледной трепонемы, в случае добавления сыворотки с антителами к трепонеме из материала человека, зараженного сифилисом, склеиваются друг с другом, то есть происходит их агглютинация.

Достоверность исследования

Важно помнить, что антитела к бледной спирохете начинают появляться в организме инфицированных людей через 2-4 недели после заражения, а в некоторых случаях этот срок может растягиваться и до 6 недель.

По этой причине чувствительность анализа на РПГА на первичной стадии развития болезни составляет около 86%, что значительно уступает точности диагностики больных на двух следующих стадиях. Чувствительность анализа для таких пациентов, как и для носителей скрытого сифилиса, достигает 99-100%.

Однако реакция пассивной гемагглютинации имеет очень высокую специфичность, которая достигает уровня 96-100%.

Это дает возможность применять данное обследование для подтверждения диагноза в случае получения положительной реакции предварительного нетрепонемного исследования, например реакции микропреципитации РМП.

Учитывая, что чувствительность трепонемных анализов, включая РПГА, существенно превышает чувствительность нетрепонемных методов, такие обследования стали все чаще назначать при проведении скрининговых анализов на сифилис. Однако при получении положительной реакции скринингового исследования для уточнения диагноза птребуется провести еще один специфический (трепонемный) анализ, но не РПГА.

Расшифровка анализа

При добавлении сыворотки с антителами к трепонеме из материала человека, инфицированного сифилисом, к реагенту, с которым проводится исследование, происходит агглютинация эритроцитов, вследствие чего они выпадают в осадок.

На количество склеенных эритроцитов влияет уровень содержания антител в сыворотке. Поэтому пассивная гемагглютинация не только показывает присутствие антител, но и позволяет установить их количество. Результат исследования представлен уровнем титра антител.

Положительная реакция говорит о наличии возбудителя болезни в организме пациента. Однако в процессе проведения диагностики возможно появление ложноположительных реакций, количество которых статистически не превышает уровня 0,05-2,5% от общего числа исследований.

Положительная реакция РПГА у людей, не инфицированных сифилисом, может проявляться в случае наличия:

системных заболеваний соединительной ткани,
в крови пациента антител к возбудителям, похожим на бледную трепонему,
физиологических патологий, например инфаркта миокарда,
гепатита В или С,
онкологических заболеваний,
тифа, лептоспироза, туберкулеза,
ВИЧ-инфекции,
боррелиоза клещевой этиологии,
обширных травм или переломов,
беременности,
в случае проведения инъекций наркотических препаратов.

В большинстве случаев ложноположительные реакции сопровождаются низким титром. Высокие показатели титра типичны для вторичной стадии болезни и ранее скрытого сифилиса. Однако они могут появиться и при ложноположительной реакции у пациентов со злокачественными новообразованиями.

У людей, хотя бы однажды переболевших сифилисом, реакция РПГА до конца жизни остается положительной.

Редкими исключениями могут служить те ситуации, когда болезнь была выявлена на ранней стадии развития, после чего была проведена интенсивная и эффективная терапия. Поэтому анализ РПГА не может использоваться для оценки динамики выздоровления или сравнительной диагностики ранней или поздней стадий болезни.

При получении положительной реакции необходимо обследовать членов семьи заболевшего человека и людей, вступавших с ним в половой контакт.

Отрицательная реакция может быть получена в следующих случаях:

человек не болен сифилисом,
неправильно взята кровь для исследования,
после заражения прошло 2-4 недели, и выработка антител еще не началась.

В любом случае результат исследования необходимо оценивать в сочетании с дополнительными лабораторными и анамнестическими показателями.

Кому показан анализ?

Врач может направить сдавать кровь на РПГА пациентов в следующих случаях:

при наличии клинических проявлений сифилиса: язвенных высыпаний, увеличенных лимфоузлов, диффузной алопеции и других,
при подозрении на возможное инфицирование в случае контакта с уже заболевшими людьми,
доноров, желающих сдать кровь,
людей, проходящих ежегодные профилактические осмотры или оформляющих санитарные книжки,
пациентов с положительной реакцией скринингового теста,
перед госпитализацией в стационарное лечебное учреждение,
при предоперационном обследовании,
для выявления возбудителей сальмонеллеза, дифтерии, дизентерии методом проведения РПГА с соответствующим диагностикумом.

Порядок проведения исследования

На исследование отправляют сданный пациентом образец венозной крови. Для того, чтобы не получить ошибочное заключение, пациенту следует ответственно отнестись к подготовке к анализу. Чтобы результаты теста были достоверными, следует придерживаться таких рекомендаций:

Сдавать анализ следует только натощак.
В день проведения анализа можно пить минеральную воду без газа в минимальных количествах.
Как минимум 30 минут до проведения анализа нельзя курить, а лучше увеличить это время до нескольких часов.
Прямой запрет налагается на употребление алкогольных напитков.
Пациенты, которым необходимо регулярно применять какие-либо лекарственные препараты, обязательно должны проинформировать об этом врача, направляющего на обследование.
В случае недомогания или плохого самочувствия нужно поставить в известность медсестру, выполняющую забор крови, или врачу амбулатории, где нужно сдать анализ.

Отнеситесь ответственно не только к вопросу, где сдать анализ, но и к подготовке к обследованию.

Диагностика других инфекционных заболеваний

Не следует думать, что такое исследование, как РПГА может проводиться только для выявления в организме возбудителя сифилиса.

Анализ с сальмонеллезным диагностикумом позволяет выявить наличие инфекции в пищеварительной системе – сальмонеллы. Начиная с четвертого дня после заражения, организм продуцирует антитела к антигенам сальмонеллы, выявить которые помогает метод РПГА. Отрицательный результат говорит об отсутствии инфекции, а про ее наличие скажет положительный титр, нарастающий от 1:200 до 1:800 в острой фазе.

Метод проведения РПГА с дифтерийным маркером позволяет диагностировать дифтерию и оценить иммунитет после проведения вакцинации. Антитела начинают вырабатываться иммунной системой уже на следующий после заражения день, и остаются в организме на протяжении нескольких недель. Чувствительность данного анализа превосходит бактериологический метод исследования. Титр 1:80 подтверждает наличие дифтерии в организме.

Дизентерийный маркер при РПГА наиболее точно выявляет шигеллез (бактериальную дизентерию), даже по сравнению методом лабораторной диагностики посредством бактериального посева. Если больной не получает качественного лечения, то болезнь перетекает в хронический процесс, при котором часто случаются рецидивы. Анализ позволяет диагностировать острую и хроническую фазу диареи, выявить возбудителя дизентерии, отличить бактериальный шигеллез от колоректального рака, эндокринных нарушений или воспаления толстой кишки. Негативная реакция говорит об отсутствии бациллы, а подтверждает ее наличие титр 1:80 для малышей или 1:320 для взрослых.

Проведение исследование с коревым маркером позволяет определить заболевание корью. Такое обследование может стать альтернативой часто проводимому для диагностики кори анализу РТГА.

Итак, РПГА анализ крови – что же это? Подводя итоги, можно смело утверждать, что это современный, высокочувствительный и достоверный метод диагностики различных заболеваний бактериологической этиологии.

Вконтакте

Сифилис – заболевание инфекционной природы, обусловленное спирохетой Treponema pallidum, склонное к прогредиентному хроническому течению, с чёткой периодизацией клинической симптоматики.

Преобладание полового пути передачи над контактным и трансплацентарным ставит это заболевание в ряд венерических (ЗППП, ИППП). Помимо указанных способов передачи инфекции особую роль играет артифициальный путь (от лат. «artificio» - искусственно созданный).

Он характерен для медицинских учреждений, в основном, реализуется в условиях стационара. Инфицирование происходит при гемотрансфузиях, различных хирургических операциях, инвазивных диагностических методах.

Несмотря на карантинизацию донорской крови, проблема выявления сифилиса у доноров на разных стадиях заболевания все ещё актуальна.

Поэтому диагностические мероприятия при сифилисе требуют стандартизации, внедрения новых чувствительных и информативных методов идентификации, а также сведения к минимуму ошибок и неправильной трактовки результатов анализов.

Показать всё

1. Классификация методов лабораторной диагностики

Диагностика сифилиса имеет некоторые особенности и отличается от диагностики других бактериальных инфекций. Сложное строение и антигенные свойства бледной трепонемы обусловливают ошибки в интерпретации результатов серологических реакций.

Сдать анализ крови на сифилис предлагают 3 основным группам пациентов:

1 Скрининг и диспансеризация групп населения (в том числе и беременность, постановка на учет в женской консультации, поступление на работу и оформление медкнижки и так далее).
2 Скрининг в группах риска (незащищенные половые контакты с человеком, инфицированным сифилисом, лица после принудительных сексуальных контактов, ВИЧ-инфицированные и так далее).
3 Лица, имеющие симптомы заболевания, или лица с подозрением на сифилитическую инфекцию.

Все лабораторные методы условно подразделяют на прямые и непрямые.

1.1. Прямые методы

1 Идентификация Treponema pallidum в тёмном поле (темнопольная микроскопия).
2 Заражение подопытных животных (культивирование в лабораторных животных).
3 ПЦР (полимеразно-цепная реакция).
4 ДНК-зонд или гибридизация нуклеиновых кислот.

1.2. Непрямые методы

Серологические реакции - это методы лабораторной диагностики, базирующиеся на обнаружении антител (сокращенно АТ) к антигенам бледной трепонемы (сокращенно АГ). Они имеют основное значение для подтверждения диагноза.

1 Нетрепонемные тесты:
- Реакция Вассермана (РСК);
- Реакция микропреципитации (МР, РМП) и ее аналоги, которые приведены ниже;
- Тест быстрых плазменных реагинов (RPR, РПР);
- Тест с красным толуидином и сывороткой (TRUST);
- Нетрепонемный тест Лаборатории исследования венерических болезней - VDRL.
2 Трепонемные тесты:
- Р-ция иммобилизации Treponema pallidum – РИБТ/РИТ;
- Р-ция иммунофлюоресценции – РИФ, FTA (разведения сывороток РИФ-10, РИФ-200, РИФ-абс);
- Р-ция пассивной гемагглютинации (РПГА, ТРПГА, TPHA);
- Иммуноферментный анализ (ИФА, EIA);
- Иммуноблоттинг.

Рисунок 1 - Алгоритм серодиагностики сифилиса

1.3. Гистоморфологические методы

Эти методы сводятся к выявлению особенностей гистоморфологии сифилитических проявлений. Внимание уделяется тонкостям строения твёрдого шанкра. Однако, дифференциальная диагностика инфекции с помощью гистологии весьма затруднительна. Гистоморфология используется с другими лабораторными и клиническими тестами.

2. Микроскопия Treponema pallidum в тёмном поле

Этот метод основывается на непосредственном обнаружении бледной трепонемы в исследуемом материале с помощью микроскопа и специальных приспособлений (чаще всего отделяемое эрозий и язв, реже спинномозговая жидкость и другие субстраты).

С помощью скарификации, соскоба, сдавливания с эрозий и язвенных дефектов получают экссудат, затем исследуют в микроскоп подготовленный препарат.

Обычно бледные трепонемы выявляют в препарате, полученном из шанкра, из очагов вторичного свежего, вторичного рецидивного сифилиса, а также пунктата лимфоузлов, плаценты.

Основанный на феномене свечения мелких частиц в тёмном поле при попадании луча света (феномен Тиндаля), метод прекрасно позволяет дифференцировать возбудителя сифилиса от других трепонем на основании морфологических отличий и отличий в способах передвижения бактерии.

Для микроскопии используют специальный темнопольный конденсор соответствующего оптического разрешения. Препарат получают способом раздавленной капли (каплю материала наносят на чистое обезжиренное предметное стекло и закрывают очень тонким покровным).

На покровное стекло капают иммерсионное масло. С помощью поворота тубуса и поворота увеличивающей линзы регулируют нужное освещение.

В тёмном поле микроскопа обнаруживаются клетки крови, эпителиальные клетки и сам возбудитель сифилиса. Бледная трепонема выглядит как спираль, очень тонкая, излучающая серебристый цвет, с плавными движениями.

Рисунок 2 - Темнопольная микроскопия как способ визуализации бледной трепонемы в исследуемом материале. Источник иллюстрации - CDC

Treponema pallidum необходимо отличать от других трепонем, в том числе и Tr. refringens, которая может содержаться в ротоглотке и на слизистой половых органов. Эта бактерия совершает хаотичные движения, имеет широкие и несимметричные, довольно грубые завитки. Кроме того, Treponema pallidum отличают от Tr. Microdentium, Tr. Buccalis и Tr. vincenti.

Визуализация бактерий в тёмном поле иногда дополняется реакцией флюоресценции. Для этого меченые флюоресцирующим красителем противотрепонемные АТ добавляют в нативный материал. При этом образуется комплекс, называемый антиген-антитело (сокращенно АГ-АТ), который и является объектом для исследования с помощью люминесцентного микроскопа.

3. Метод полимеразной цепной реакции (ПЦР)

ПЦР, разработанная в 1991 году для обнаружения молекулы дезоксирибонуклеиновой кислоты (ДНК) бледной трепонемы, является высокочувствительным и специфичным, позволяет выявить фрагменты ДНК возбудителя.

Базируется данный анализ на копировании коротких участков ДНК бледной спирохеты, который удовлетворяет заданным параметрам и присутствует в образце. Всё это выполняется в искусственных условиях (in vitro). Реакция проводится в приборе - амплификаторе, который обеспечивает периодизацию температурных циклов. Происходит охлаждение с последующим нагреванием пробирок с погрешностью в 0,1˚С.

ДНК-матрицу прогревают в течение 2 минут при температуре 92-98˚С (максимальная температура используется, если полимераза термостабильна). При нагревании цепи ДНК расходятся из-за распада водородных связей между ними. В стадии отжига температуру реакции снижают для связывания праймера с одноцепочечной матрицей.

Отжиг занимает около 30 секунд, в течение этого времени синтезируются сотни нуклеотидов. Вновь синтезируемые молекулы копируются полимеразой, в результате многократно увеличиваются специфические фрагменты дезоксирибонуклеиновой кислоты. Последующая детекция фрагментов проводится с помощью электрофореза в геле агар.

ПЦР-диагностика сифилиса пока носит экспериментальный характер, но оправдана при выявлении врождённой инфекции, в сложных диагностических случаях или при минимальном содержании бледных трепонем в исследуемом материале.

4. ДНК-гибридизация

ДНК-гибридизация выполняется in vitro и основана на полном или частичном соединении двух одноцепочечных молекул ДНК в одну молекулу. В случае полного соответствия комплементарных фрагментов объединение происходит легко. Если комплементарное соответствие частичное, то объединение цепочек ДНК происходит медленно. На основании времени слияния цепей можно оценить степень комплементарности.

При нагреве ДНК в буферном растворе разрываются водородные связи азотистыми основаниями, являющимися комплементарными, в результате цепочки ДНК расходятся. Далее получают препарат из двух денатурированных дезоксирибонуклеиновых кислот. При охлаждении одноцепочечные участки ренатурируют. Образуется так называемый гибрид ДНК.

Метод позволяет оценить и анализировать скорость отжига, учитывая особенности (сходства и различия) ДНК между видами или внутри вида.

Применение ДНК-зонда заключается в гибридизации меченого фрагмента ДНК со специфичным участком ДНК для идентификации комплементарных последовательностей нуклеотидов. Для метки зонда используется группа ненасыщенных атомов (хромофоры) или радиоактивные изотопы.

ДНК–зонд применяют для гетерогенного и гомогенного детектирования нуклеиновых кислот. Роль зонда заключается в определении участков, на которых произошло слияние мишень-зонд. Детектирование в гомогенной системе имеет преимущество - позволяет отследить гибридизацию молекул ДНК в реальном времени.

Суть метода сводится в денатурации ДНК и ренатурации (воссоединения цепочек ДНК). Процесс ренатурации нуклеиновой кислоты и ДНК-зонда заканчивается образованием «гибрида».

Специфические последовательности нуклеиновых кислот гибридизуются с ДНК–зондом и, таким образом, выявляются и позволяют оценить количество ДНК в исследуемом материале.

5. Заражение лабораторных животных

Высокая чувствительность кроликов к Treponema pallidum (порядка 99,9%) позволяет применять их в диагностике сифилитической инфекции.

Заражение кроликов проводится в научно-исследовательских центрах и является «золотым стандартом» оценки чувствительности других методов.

Вернёмся к трепонемным и нетрепонемным тестам, так как они используются чаще всего. Рассмотрим их преимущества и недостатки, а также ошибки в интерпретации результатов.

6. Нетрепонемные тесты

Это тесты определения антител IgG и IgM к стандартизированному кардиолипиновому антигену. Их существенным недостатком является сравнительно небольшая специфичность.

Низкая стоимость и простота выполнения позволяют отнести эти тесты к отборочным диагностическим, необходимым для установки предварительного диагноза и скрининга среди населения.

Именно нетрепонемные тесты сдаются при оформлении медицинской книжки, устройстве на работу, постановке на учет в женской консультации.

Недостатки:

1 Минимальная чувствительность в стадии сифилиса первичного – 70%;
2 Минимальная чувствительность в стадии сифилиса позднего – 30%;
3 Возможность появления ложноотрицательных и ложноположительных результатов;
4 Трудоёмкость выполнения РСК.

Преимущества:

1 Относительно маленькая стоимость производства тестов;
2 Получение быстрого ответа;
3 Возможность их применения для скрининга.

Получение ложноположительных или слабоположительных проб возможно в следующих случаях:

1 Нарушение технологии выполнения, при блокировании комплекса АГ-АТ.
2 Наличие у больного аутоиммунных заболеваний (ревматоидный артирит, ревматизм, склеродермия, системная красная волчанка, саркоидоз и др.).
3 Злокачественные новообразования.
4 Вирусные и бактериальные инфекции.
5 Эндокринные заболевания (аутоиммунный тиреоидит, сахарный диабет).
6 Беременность.
7 Употребление алкоголя.
8 Приём жирной пищи.
9 Старческий возраст.

Как видно из списка, существует достаточно причин для неверного результата. Поэтому к нему следует весьма настороженно относиться. Рассмотрим наряду с РСК ещё две пробы. Это реакция микропреципитации и VDLR (ее модификация).

7. Реакция связывания комплемента (РСК, Вассермана, RW)

Это проба, основанная на способности комплемента связываться с комплексами АГ-АТ. Идентифицируют образовавшийся комплекс с помощью гемолитической системы. Кардиолипиновый антиген заметно повышает чувствительность пробы.

Чувствительной является и реакция Колмера, которая заключается в выполнении при различных температурных режимах. Так, первая фаза реакции Колмера протекает при температуре 20˚С в течение получаса, вторая фаза при тепературе 4-8˚С на протяжении 20-ти часов. За это время происходит связывание комплемента.

При выполнении РСК возможно получение резко положительных результатов. Причиной, вероятно, является большой титр антител в неразведенной сыворотке. В этом случае пробы ставят с уменьшающими дозами.

Для дифференцировки стадий сифилиса и оценки эффективности противосифилитического лечения определяют количество АТ в сыворотке.

Позитивность пробы оценивают с помощью крестов, также в реакциях Вассермана, Колмера и Канна указывается разведение сыворотки.

8. Реакция микропреципитации

Так как трудоёмкость выполнения вышеуказанных проб велика, то для широты обхвата диспансеризацией разных групп населения разработан ускоренный способ серодиагностики сифилиса, так называемый экспресс-метод – реакция микропреципитации (сокращенно МР, РМП).

Она выполняется с кардиолипиновым антигеном и вспомогательными веществами. Его преимуществом является забор периферической крови для исследования. Это значительно ускоряет и саму методику, и работу лаборантов.

Рисунок 2 - Реакция микропреципитации (схема)

Для проведения МР необходимы плазма или инактивированная сыворотка крови пациента (именно они содержат антитела). Далее плазму помещают в маркированные лунки. Затем, к исследуемому материалу добавляют каплю кардиолипинового антигена, смешивают и встряхивают. В итоге в сыворотке инфицированного появляются характерные хлопья, разные по степени интенсивности.

Это качественная проба. При количественной оценке используются 10 разведений сыворотки, помещаемой в 10 лунок с соответствующей маркировкой. При качественной МР ответ указывается в виде крестов (плюсов) или минуса, при количественной указывается титр антител (1:2, 1:4 и так далее).

Наличие хлопьев расценивается как положительный или слабоположительный ответ. Возможно появление флокулята и при отсутствии заболевания, поэтому окончательную оценку полученного результата проводят после контрольного исследования или проведения других реакций (РИБТ, РИФ, ИФА, РПГА).

9. VDRL

Рекомендованный Всемирной организацией здравоохранения метод постановки реакции с антигеном липоидной природы (АГ) по праву считается лучшим среди других стандартных нетрепонемных тестов. Разработан в США, штате Джорджиа в лаборатории венерических болезней (Veneral Diseases Research Laboratories).

Аббревиатура учреждения послужила названием для пробы – VDRL. VDRL - это модификация МР. Сыворотку от больного сифилисом инактивируют и помещают на предметное стекло. Используемый антиген состоит из кардиолипина, холестерина и лецитина в разном процентном соотношении. Ответ регистрируется практически сразу.

Отчётливая флокуляция возникает в присутствии в сыворотке антител. Сыворотка становится реактивна по прошествии 4-х недель после заражения. Для оценки количества антител, сыворотку предварительно разводят в геометрической прогрессии.

Преимущества VDRL:

1 сравнительно высокая чувствительность;
2 сравнительно высокая специфичность;
3 легкость выполнения;
4 малая стоимость реактивов;
5 получение быстрого ответа.

Недостатком VDRL является относительно высокая частота ложноположительных результатов.

Их причинами являются всё те же перечисленные выше заболевания.

Трепонемные тесты исполняются со специфическими АГ Treponema pallidum. Они необходимы и обязательны для установления окончательного диагноза. Это реакция иммунофлюоресценции (РИФ), реакции непрямой гемагглютинации (РПГА), иммуноферментный анализ (ИФА) и др.

После положительного результата нетрепонемного теста (RPR, MP, VDRL) всегда должны выполняться трепонемные (чаще комбинация - РПГА, ИФА, РИФ).

Трепонемные тесты более сложны в исполнении, чем экспресс-тесты, и требуют больших затрат денежных средств.

10. РИФ

Данная реакция (сокращенно РИФ) используется для диагностики сифилиса, в том числе и скрытых форм, и перепроверки положительных и ложноположительных проб.

РИФ основана на свечении меченых антител при соединении с комплексом антиген-антитело под кварцевой лампой. Метод начал применяться в 60-х годах и отличался простотой выполнения и высокой специфичностью (которая немного уступает РИБТ).

Он имеет несколько модификаций: РИФ-10, РИФ-200 и РИФ-abs.

Наиболее чувствительна РИФ в разведении 10 раз, а остальные - более специфичны. РИФ проводится в двух фазах. К АГ добавляют сыворотку крови пациента. Образуется комплекс АГ-АТ, который исследуется в следующей фазе. Далее меченный с помощью флюоохрома комплекс идентифицируют при микроскопии. Если не наблюдается свечение, это указывает на отсутствие специфических АТ в сыворотке крови.

РИФ-200 является наиболее ценным из всех разведений. Метод предназначен для диагностики различных форм сифилиса, особенно скрытого сифилиса и перепроверки положительных проб.

11. РИБТ

Реакция иммобилизации бледных трепонем (сокращено РИБТ, РИТ) одна из сложных серологических проб, требующих значительных усилий и финансовых затрат. РИБТ применяют все реже, но актуальность ее сохраняется в диагностике скрытого сифилиса.

Большое значение она несёт в распознавании ложноположительных результатов у беременных женщин и основывается на иммобилизации бактерий в присутствии иммобилизинов – поздних антител.

Результат оценивается на процентном количестве (%) иммобилизированных трепонем с помощью специальной таблицы:

1 От 0 до 20 - отрицательная проба.
2 От 21 до 50 - слабоположительная проба.
3 От 50 до 100 - положительная реакция.

Ложноположительные результаты также возможны при применении РИБТ. Так, неверный ответ возможен при инфицировании тропическими трепанематозами, а также, при туберкулёзе, циррозе печени, саркоидозе и пациентов старческого возраста.

12. РПГА

Этот анализ крови на сифилис называется реакцией пассивной гемагглютинации (сокращенно, кровь на РПГА, ТРПГА).

Антиген для РПГА приготавливают из эритроцитов барана, покрытых фрагментами бледных трепонем (полученных от инфицированных кроликов (см. рисунок 4)). Для анализа используется венозная кровь (плазма или инактивированная сыворотка) пациента.

При добавлении антигена в сыворотку пациента с сифилисом происходит образование комплекса АГ-АТ, который приводит к агглютинации эритроцитов. агглютинация определяется субъективно врачом-лаборантом.

Рисунок 3 - Схема РПГА (реакция пассивной гемагглютинации)

Проба оценивается как положительная при появлении агглютинатов равномерной розовой окраски. Окрашивание преципитата в красный свидетельствует об осаждении эритроцитов. РПГА является высокочувствительной и высокоспецифичной.

12.1. Реакция микрогемагглютинации

Она является упрощённым вариантом РПГА. Отличается от пробы, описанной выше, меньшим количеством антигена, разбавителя и сыворотки крови для выполнения реакции. Через 4 часа после инкубации сыворотки можно оценить пробу. Используется при скрининговых и массовых обследованиях на сифилис.

13. Иммуноферментный анализ

Иммуноферментный анализ (сокращенно ИФА) базируется на специфической реакции антиген-антитело. Биологический материал (сыворотка крови пациента, ликвор) вносят в лунки, на твердой поверхности которых фиксированы антигены бледной трепонемы. Исследуемый материал инкубируют, затем отмывают антитела, не связавшиеся с антигенами (см. рисунок 5).

Идентификация полученного комплекса осуществляется на этапе ферментации с помощью иммунной сыворотки, меченной ферментом. При химической реакции фермент окрашивает полученные комплексы. Интенсивность окрашивания зависит от количества специфических антител в крови пациента и фиксируется спектрофотометром.

Рисунок 4 - Схема ИФА (иммуноферментного анализа)

Чувствительность ИФА составляет более 95% . Метод используется в автоматизированном режиме для исследования декретируемых групп населения: доноров, беременных и других, для уточнения диагноза при положительных и ложноположительных нетрепонемных тестах.

14. Иммуноблоттинг

Иммуноблоттинг – высокочувствительный метод, модификация простого ИФА. Реакция основана на электрофорезе с разделением антигенов бледных трепонем.

Разделенные иммунодетерминанты переносят на нитроцеллюлозную бумагу и проявляют в ИФА. Далее инкубируют сыворотку и смывают не связавшиеся антитела. Полученный материал обрабатывают иммуноглобулинами (IgМ или IgG), меченными ферментом.

15. Клиническая оценка результатов лабораторной диагностики сифилиса

В таблице 1 ниже мы привели возможные результаты анализов и их расшифровку. Как можно видеть в таблице, основное значение при расшифровке имеет комплексная оценка тестов.

Таблица 1 - Расшифровка результатов серологических реакций (анализов крови на сифилис). Для просмотра кликните по таблице

Оценка реактивности тестов выполняется также «крестами»:

1 Максимальный ответ (резко положительная проба) обозначается с помощью 4-х крестов.
2 Положительная проба обозначается с помощью 3-х крестов.
3 Слабоположительную реакцию обозначают двумя крестами.
4 Один крест свидетельствует о сомнительном и отрицательном результате.
5 Отрицательный ответ маркируют знаком «минус».

Проблема оптимизации лабораторной диагностики сифилиса не потеряла свою актуальность до настоящего времени. Современные методы диагностики, несмотря на стремление учёных привести диагностику к максимально высоким показателям чувствительности и специфичности, требуют контрольной проверки и индивидуального подхода.

Особенностью сифилитической инфекции является феномен серорезистентности, который так и не получил научного объяснения. Диагноз выставляется после полноценного обследования больного эпидемиологическими, клиническими, лабораторными методами.

На фоне экономико-технического развития медицины наблюдается и прогресс в разработке новых критериев диагностики сифилиса. Всё это позволит быстро, успешно и безошибочно лечить пациентов.

Очень часто пациенты выходят из кабинета с квадратными глазами, разглядывая кучу бланков на сдачу анализов в руках. Общий анализ крови и анализ мочи вопросов не вызывают, зато все остальные!

Например, кровь на РПГА. Что это за странные буквы? Для чего берут "лишнюю" кровь, когда уже все ясно?

Это только пациенту кажется, что все понятно, а врачу для того, чтобы поставить диагноз, нужен именно этот анализ.

Что это за хитрый анализ?

Если дали направление с этими странными буквами в бланке "на РПГА", что это будет обозначать? Это исследование не назначается при обычной диагностике.

Анализ очень специфический. Делается, чтобы определить стадию сифилиса. В том случае, когда общепринятый анализ на RW - реакцию Вассермана - оказался положительным, или доктор сомневается, что его показатель достоверный. Врачу требуются значения РПГА, чтобы назначить адекватную терапию.

В чем сущность РПГА?

Для тех, кто хочет узнать подробнее о том, РПГА - что это, мы даем ответ. Это специфический трепонемный тест. Если говорить медицинским языком, не совсем понятным простым обывателям, - реакция пассивной гемагглютинации.

В ее основу легло то, что агглютинация эритроцитов, на поверхности которых нашел приют возбудитель сифилиса, называемый или спирохетой, происходит с образованием трепонемных антител.

Агглютинация - процесс, при котором из состава взятой на анализ крови под воздействием специальных реактивов выпадает осадок из каких-либо бактерий, вирусов и прочих инородных включений.

Чем больше оседает эритроцитов с внедрившейся в них трепонемой, тем выше стадия заражения.

Что такое сифилис?

Даже столкнувшись с таким заболеванием, как сифилис, не все могут понять, насколько оно серьезно и чем чревато.

Это венерическая болезнь. Заразиться можно:

через слюну;
через влагалищный секрет;
через сперму;
бытовым путем при наличии повреждений на поверхности кожи;
ребенку может передаться сифилис через молоко больной матери.

На первой стадии заражения болезнью появляются шанкры - плотные образования или язвы, затем они исчезают.

Вторичная стадия характеризуется сыпью и увеличением лимфатических узлов.

Третья и четвертая стадии этой неприятной болезни могут выразиться в поражении головного мозга, сердечно-сосудистой системы, костных разрушениях и прочих патологических изменениях в организме.

Если у беременной женщины сифилис, то дети рождаются с острыми патологиями, которые касаются практически всех жизненно важных систем.

Если врач назначил сдать кровь на РПГА, что это такое, можно уточнить для общего развития, но отмахиваться от такого серьезного анализа нельзя! Сифилис требует обязательного лечения.

Те, кто имеют это заболевание, представляют серьезную опасность для окружающих.

Экспересс-диагностику заболевания - реакцию Вассермана или RW - обязательно делают всем, кто устраивается на работу или попадает на лечение в стационар.

Как прочитать результаты анализа?

Анализ сдан, и на руки выдали бланк с непонятными цифрами. Например, РПГА - 1/320. Что это может обозначать?

Цифры пишутся на бланке в том случае, если в организме обнаружена Если ее нет, то там будет написано слово "отрицательно". Значит, заболевание отсутствует, даже если реакция Вассермана была положительной.

РПГА показывает заболевание не ранее чем через 4 недели после внедрения трепонемы в организм, то есть после окончания инкубационного периода.

Цифры значения - это титры.

Анализ РПГА положительный еще будет долгие годы после того, как сифилис излечен.

Это интересно

Тема специфическая, но и сифилис - инфекция непростая. Страх заразиться им может отравить жизнь. Положительный РПГА и RW так выбивают из колеи, что некоторых особо нервных пациентов это заставляет задумываться о самоубийстве.

Не нужно сразу впадать в панику! Например, реакция Вассермана может показать наличие сифилиса во время беременности, при ангине и некоторых других заболеваниях. Именно для уточнения того, есть ли болезнь, и берут дополнительные анализы, один из которых - РПГА - анализ крови, который точно показывает, есть ли трепонема в организме, и какая стадия у заболевания.

Но и это исследование может оказаться неточным при некоторых воспалительных заболеваниях внутренних органов. Ложноположительный РПГА - что это может означать, кроме сифилиса? Например, острое воспаление селезенки.

Поэтому получив на руки первичные результаты, не нужно паниковать. Есть вероятность, что после повторной сдачи крови результат окажется отрицательным.

Если несколько специфических анализов крови на сифилис показывают положительный результат, только тогда заражение считается 100%.

Поэтому и проводят комплексное обследование. Оно состоит из:

реакции Вассермана;
РПГА;
ИФА - иммуноферментного анализа;
РИБТ, который выявляет сифилис при отсутствии внешней симптоматики на поздних стадиях.

К сожалению, сифилис - такая болезнь, которой можно заражаться несколько раз. Иммунитет после перенесенного заболевания не появляется.

Аббревиатура РПГА характеризует анализ крови, в результате которого в организме человека можно обнаружить возбудителей сифилиса. Это заболевание передается, как половым, так и бытовым путями. Поэтому совершенно неважно, насколько чистоплотен в быту и половой жизни человек. Это может коснуться каждого. Анализ РПГА способен определить любую из стадий прогрессирующей болезни.

Анализ РПГА осуществляется методом определения в плазме крови антител вируса бледной трепонемы. Название вирус получил из английского языка, от словосочетания Treponema pallidum. Необходимость проведения анализа возникает в случаях обнаружения у пациента симптомов сифилиса.

Также исследование может назначаться с профилактической целью. Например, на этапе планирования беременности или перед тем, как использовать донорскую кровь для переливания другому пациенту.

Определить присутствие антител трепонемы в организме человека можно через 2-4 недели после инфицирования. Поэтому желательно анализировать результаты в динамике. Именно так они будут наиболее достоверными.

ложноположительный результат

Также ложноположительный результат может быть во время беременности, при инфаркте миокарда или раковых образованиях в организме. Поэтому важно неоднократно проверять диагноз, чтобы избежать ненужного лечения.

Расшифровка

Результат анализа РПГА должен расшифровывать лечащий врач. Исследование определяет титры реакции, которые символично записываются двумя цифрами. Низкими титрами считается результат меньше, чем 1:320. Он характерен для первичной стадии заболевания. На следующей стадии показатели будут иными – больше указанного в первом случае числа.

При наличии сифилиса скрытого характера показатели будут такими же, как в случае с первичной стадией болезни. Результаты анализа также позволяют определить вероятность получения ложных результатов. Однако это может сделать только лечащий врач.

Показания к анализу

Анализ РПГА показан далеко не во всех случаях. Однако специалисты советуют регулярно обследоваться на предмет присутствия вируса трепонемы . Дело в том, что под влиянием определенных факторов болезнь может развиваться бессимптомно. Кроме того, заразиться можно не только, имея беспорядочные сексуальные связи, но и, посещая стоматолога, маникюрный кабинет и т.д.

Основными показаниями к проведению анализа считают следующее:

Наличие на теле сыпи любого характера;
Общее ухудшение самочувствия;
Увеличение лимфоузлов;
Частые головные боли;
Увеличение количества лейкоцитов;
Повышение температуры тела;
Болезненные ощущения в костях и мышцах;

Однако следует помнить, что симптомы могут и вовсе отсутствовать. Согласно статистике, в группу риска входят люди, ведущие раскрепощенную половую жизнь, наркоманы, лица без постоянного места жительства и т.д. Сифилис относят к заболеваниям, заражение которыми несет за собой уголовную ответственность, поскольку болезнь чревата летальным исходом.

Положительный

Если результат анализа РПГА оказался положительным, то это еще не повод для паники. Для постановки точного диагноза необходимо осуществить повторное исследование и исключить факторы, которые могли дать ложноположительный результат.

Если диагноз подтверждается, то больному назначается комплексное лечение . Чаще всего пациента помещают в кожно-венерологический диспансер, где терапия совмещается с контролем над состоянием больного. Заболевание является достаточно серьезным, поэтому курс лечения может превышать по своей продолжительности срок в два года.

На брюшной тиф

Другим, не менее опасным заболеванием считается брюшной тиф . Его наличие определяется специальным анализом, выявляющим присутствие в организме вируса сальмонелла. В большинстве случаев, заболевание происходит бытовым путем.

Симптомы недуга, в первую очередь, проявляются в ухудшении общего состояния человека. Повышается температура, появляется головная боль, может развиться лихорадочное состояние, становится нестабильным стул, появляются локальные боли в области живота.

Для определения брюшного тифа назначают сразу несколько типов анализов. К ним относят общий и биохимический анализы крови. Также необходим специальный тест, который обнаруживает антитела вируса заболевания. В качестве материала для исследования выступает кровь, взятая из вены.

Для достоверности результата перед проведением анализа рекомендуется соблюдать нормы подготовки к нему. Сдавать кровь необходимо строго натощак в часы, назначенные лечащим врачом.

Если вирус уже присутствовал в организме определенного человека, то даже при отсутствии заболевания, тест покажет наличие антител. В этом случае через пять дней показан повторный анализ, который покажет, растет ли число антител или остается на прежнем месте. Если антител становится больше, то это говорит о том, что заболевание прогрессирует. Окончательный диагноз может поставить только квалифицированный специалист.

Лечение болезни заключается в приеме противомикробных средств. Также производится борьба с интоксикацией организма. В процессе лечения пациенту показан постельный режим под присмотром медицинского персонала.

Профилактические меры против заболевания подразумевают вакцинацию и соблюдение правил гигиены. Необходимо регулярно мыть руки перед едой, тщательно промывать овощи и фрукты и проводить термическую обработку перед употреблением в пищу мясных продуктов. После избавления от болезни пациенту производят вакцинацию, которая препятствует его превращению в переносчика вируса.