Флюоресцентная гибридизация in situ. Применение технологии FISH

Предлагает клиника Ассута. Флуоресцентная гибридизация, иначе именуемая ФИШ (FISH) – генетический тест, дающий представление о природе опухоли. Изучая новообразование методом ФИШ, врач узнает, является ли рак положительным или отрицательным по отношению к гену HER2. Присутствующие в клетках организма копии гена стимулируют рост атипичных раковых клеток. После пройденной диагностики, врач сможет составить наиболее детальный план лечения.

Современный лабораторный комплекс клиники Ассута проводит ФИШ (FISH) анализ для оценки раковых патологий груди:

Уникальное тестирование дает точное представление о характере опухоли, ее особенностях.
Частный госпиталь располагает мощными ресурсами для достижения результата.
У нас работают лучшие врачи Израиля, диагностика и терапия проводятся по индивидуальным схемам.

Позвоните, чтобы узнать, как оформиться на лечение. Восстановите здоровье в крупнейшем госпитале на территории Ближнего Востока.

Записаться на консультацию

Фиш тест при раке молочной железы – механизм развития онкологии

Рецепторы гена HER2 отвечают за выработку HER2 белков, которые являются рецепторами, присутствующими в злокачественных клетках. При активизации рецепторов в раковые клетки поступает сигнал о необходимости деления и размножения. В норме HER 2 рецепторы регулируют рост клеток молочной железы, поддерживая баланс здоровья в тканях.

Однако доказано, что ген HER 2 избыточно вырабатывается в одном из пяти случаев онкологии. Это означает, что вместо одной копии гена у человека присутствует ген от каждого родителя. Это объясняет избыток HER рецепторов в организме, вызывая бесконтрольный и агрессивный рост опухоли.

Пройти фиш анализ при раке молочной железы необходимо для того, чтобы узнать, насколько причина развития патологии в организме связана с аномальным продуцированием рецепторов. Вы должны знать, является ли тип рака HER2 положительным или отрицательным. Существуют методы лечения, специально разработанные для рецепторов HER 2 положительного рака груди. Анализ позволяет не терять время на поиск результативных методов воздействия.

Когда проводится fish реакция при раке молочной железы, врач использует профильные окрашивающие вещества для визуализации хромосомных нарушений. Нанесенный на изучаемые ткани раствор дает возможность увидеть аномалии. Преимуществом ФИШ анализа является то, что с его помощью можно обнаружить генетические отклонения, которые слишком малы для изучения под микроскопом альтернативными методами.

Еще одно достоинство тестирования - результаты пациент получает на руки спустя несколько дней в то время, как другие методы дают расклад лишь через несколько недель. Кроме определения злокачественной опухоли молочной железы фиш тест используется в диагностике раковой патологии мочевого пузыря , при определении лейкозов .

Виды анализов

Для выяснения положительной или отрицательной природы HER2 врачи клиники Ассута направляют пациента на тестирование в собственную лабораторию. Различают два типа тестов:

Иммуногистохимия – IHC выявляет большое количество белка. Во время испытания патолог изучает ткани под микроскопом, используя специальные окрашивающие вещества. Дальнейшие испытания не требуются при 1+ результате или 0 показателе. Результат 2+ считается неопределенным, при котором необходимо пройти дальнейшее тестирование. Результат 3+ подтверждает негативный сценарий.
МОГ тест (гибридизация) – следующий шаг при подозрении на онкологию. Важно, чтобы анализ проводил опытный патолог, что позволит исключить ошибки при расшифровке полученных результатов. Существует два основных типа теста – фиш исследование при раке молочной железы и метод светлого поля. Положительный фиш тест является окончательным методом диагностики .

Очень редко fish анализ бывает неопределенным или двусмысленным. При таком стечении обстоятельств требуется еще одна биопсия и новая фиш реакция при раке молочной железы для подтверждения диагноза.

Как проходит фиш тест при раке молочной железы – руководство для пациента

Для грамотной диагностики статуса HER 2 врач проводит биопсию, в процессе которой изымает образцы измененных патологией тканей. В большинстве случаев используется местная анестезия, чтобы нейтрализовать дискомфорт. В дальнейшем извлеченная ткань направляется на исследование в лабораторию, где с ней работает патолог. Очень важно, чтобы лаборатория являлась авторитетной в медицинской среде, потому что от правильности постановки диагноза напрямую зависит жизнь пациента. Доказано, что fish тест при раке молочной железы – безопасная процедура. Он не требует много времени, отдельных процедур кроме биопсии и дополнительной травматизации тканей.

Почему изначально проводится IHC тестирование? Это проще и доступнее. Однако, если анализы неубедительны, тестирование ФИШ обязательно к проведению. В редких случаях возможна повторная биопсия с забором проб. Но это, действительно, происходит крайне редко. Если анализ fish при раке молочной железы показал положительный HER2 результат, вам будет назначено эффективное лечение HER2 положительного рака. Несмотря на то, что это агрессивная форма патологии, перспективы для людей с таким диагнозом в последние годы значительно улучшились. Это связано с новыми и эффективными методами лечения рака груди в Израиле , нацеленными на HER 2 рецепторы.

Подать заявку на лечение

Традиционная цитогенетика при изучении кариотипа всегда была ограничена бэндовым уровнем разрешения. Даже при использовании высокоразрешающих методов дифференциального окрашивания хромосом мы всего лишь выявляли большее количество бэндов на хромосоме, но не были уверены, что добираемся до молекулярного уровня разрешения. Последние достижения ДНК-технологий и цитогенетики сделали возможным использование методов FISH для анализа изменений хромосомной ДНК на молекулярном уровне. Молекулярная цитогенетика обеспечила революционный прорыв в цитогенетике, позволив:

Осуществлять анализ структуры ДНК хромосом в диапазоне 10-100 килобаз;
проводить диагностику неделящихся интерфазных клеток, что оказало огромное влияние на пренатальную диагностику и преимплантационную генетическую диагностику (ПГД).

Технология FISH использует ДНК-зонд, который связывается или ренатурирует специфические последовательности ДНК внутри хромосомы. Денатурированный зонд инкубируется с нативной ДНК клетки, также денатурированной до одноцепочечного состояния. Зонд замещает биотин-дезоксиуридинтрифосфат или дигоксигенин-уридинтрифосфат на тимидин. После ренатурации зондом нативной ДНК комплекс «зонд-ДНК» можно обнаружить при добавлении меченного флюорохромом авидина, связывающегося с биотином, или меченного флюорохромом антидигоксигенина. Дополнительное усиление сигнала можно получить, добавив антиавидин и изучив получившийся комплекс с помощью флюоресцентной микроскопии. Пометив несколькими различными флюорохромами разные ДНК-зонды, можно одновременно визуализировать несколько хромосом или хромосомных сегментов внутри одной клетки в виде разноцветных сигналов.

Возможность определения специфических генных сегментов , имеющихся или отсутствующих на хромосомах, позволила диагностировать синдромы генных последовательностей на уровне ДНК, как, впрочем, и транслокации в интерфазных ядрах, зачастую - в отдельных клетках.

Материалом для FISH могут служить или метафазные хромосомы, полученные из делящихся клеток, или интерфазные ядра из клеток, не находящихся в стадии деления. Срезы предварительно обрабатывают РНКазой и протеиназой для удаления РНК, которая может вступать в перекрестную гибридизацию с зондом и хроматином. Затем их нагревают в формамиде, чтобы денатурировать ДНК, и фиксируют ледяным спиртом. Затем зонд подготавливают к гибридизации путем нагревания. После этого зонд и хромосомный препарат смешивают и герметизируют покровным стеклом при 37 °С для гибридизации. Изменяя температуру инкубации или солевой состав раствора для гибридизации, можно повысить специфичность связывания и уменьшить фоновую маркировку.

Применение флюоресцентной гибридизации in situ - технологии FISH

Эффективность технологии FISH впервые была продемонстрирована при локализации генов на . С внедрением метода флюоресцентного мечения, гибридизация in situ оказалась незаменимой для диагностики хромосомных аномалий, не выявляемых традиционными методами бэндинга. FISH также сыграла ключевую роль в совершении одного из самых необычных открытий современной генетики - геномного импринтинга.

Свое развитие технология FISH получила в трех формах. Центромерные, или альфа-сателлитные, зонды характеризуются относительной хромосомной специфичностью, их использовали чаще всего в генетике интерфазных клеток. Эти зонды генерируют в некоторой степени диффузные сигналы адекватной силы в области центромеры, но не вступают в перекрестную гибридизацию с хромосомами, имеющими аналогичные центромерные последовательности. В настоящее время разработаны однокопийные зонды, дающие дискретный сигнал от специфического бэнда хромосомы и позволяющие избежать феномена перекрестной гибридизации. Эти зонды также можно использовать для определения копийности и специфичных регионов хромосомы, предположительно связанных с тем или иным синдромом. Однокопийные и центромерные зонды, разработанные для хромосом 13, 18, 21, X и Y, используют для пренатальной диагностики.

Возможно также «окрашивание» целых хромосом с помощью FISH . Благодаря технологии спектрального кариотипирования, при которой используют смесь различных флюорохромов, теперь стало возможным создание уникального флюоресцентного паттерна для каждой отдельной хромосомы с 24 отдельными цветами. Эта технология позволяет определять сложные хромосомные перестройки, не видимые при использовании традиционных цитогенетических методик.

Метод FISH в пренатальной диагностике. Для женщин старшего репродуктивного возраста беременность может оказаться поводом не столько для радости, сколько для беспокойства. С возрастом женщины связан риск развития хромосомных аномалий плода. Амниоцентез, осуществляемый на 16-й неделе беременности, с последующим анализом кариотипа занимает 10-14 дней. Использование FISH в предварительном обследовании позволяет ускорить диагностику и уменьшить время ожидания. Большинство генетиков и лабораторий придерживаются мнения, что метод FISH не следует использовать изолированно для принятия решения о дальнейшем ведении беременности. Метод FISH обязательно следует дополнять кариотипическим анализом, и его результаты как минимум должны коррелировать с патологической картиной ультразвукового исследования (УЗИ) или биохимического скрининга по крови матери.

Синдромы генных последовательностей известны также под названием синдромов микроделеции, или сегментарной анеусомии. Это делеции смежных фрагментов хромосомы, вовлекающие, как правило, многие гены. Синдромы генных последовательностей были впервые описаны в 1986 г. с использованием классических методик цитогенетики. Теперь, благодаря FISH, возможна идентификация субмикроскопических делеции на уровне ДНК, что позволило выявлять наименьший делецированный регион, связанный с развитием того или иного синдрома, получивший название критического региона. После определения критического региона для синдрома зачастую становится возможным идентифицировать специфические гены, отсутствие которых признают ассоциированным с этим синдромом. В недавно вышедшем руководстве по синдромам генных последовательностей сообщают о 18 синдромах делеции и микроделеции, ассоциированных с 14 хромосомами. Некоторые наиболее часто встречающиеся синдромы генных последовательностей и их клинические проявления приведены в табл. 5-2.

Теломеры - образования, прикрывающие с концов длинные и короткие плечи хромосом. Они состоят из повторяющихся последовательностей TTAGGG и предотвращают слияние концевых участков хромосом между собой. Теломерные зонды играют важную роль в распознавании комплексных транслокаций, которые невозможно определить традиционными цитогенетическими методами. Кроме того, одним из открытий Проекта «Геном человека» был тот факт, что регионы хромосом, прилежащие к теломерам, богаты генами. В настоящее время показано, что субмикроскопические субтеломерные делеции ответственны за возникновение многих генетически обусловленных заболеваний.

Транскрипт

1 Цитогенетические методы: кариотипирование, FISH Михаил Кибанов, к.б.н. Лекция прочитана в рамках проекта genschool.ru, октябрь 2016 г.

2 Цитогенетика: где мы?

3 Цитогенетика Изучение генетической конституции клеток человека с помощью визуализации и анализа хромосом Совокупность методов анализа Выявление типа хромосомной аномалии Установление взаимосвязи между аномальным фенотипом пробанда и хромосомной патологией

4 Методы Кариотипирование Interphase-FISH Metaphase FISH Multi-color FISH MCB-FISH CGH Array-CGH

5 «Рождение» медицинской цитогенетики 1956 г: нормальный хромосомный набор человека 46 хромосом The chromosome number in man. JOE HIN TJIO and ALBERT LEVAN. Hereditas, vol. 42, pp г: хромосомный набор пациентов с синдромом Дауна 47 хромосом . LEJEUNE J, GAUTIER M, TURPIN R. C R Hebd Seances Acad Sci. 248(11): French

6 «Золотой век» цитогенетики Генетическая природа синдрома Клайнфельтера A case of human intersexuality having a possible XXY sex-determining mechanism. JACOBS PA, STRONG JA. Nature Jan 31; 183(4657): Генетическая природа синдрома Шерешевского-Тернера A sex-chromosome anomaly in a case of gonadal dysgenesis (Turner"s syndrome). FORD CE, JONES KW, POLANI PE, DE ALMEIDA JC, BRIGGS JH. Lancet Apr 4;1(7075): Генетическая природа синдрома Патау (+13) Multiple congenital anomaly caused by an extra autosome. PATAU K, SMITH DW, THERMAN E, INHORN SL, WAGNER HP. Lancet Apr 9;1(7128): Генетическая природа синдрома Эдвардса (+18) A new trisomic syndrome. EDWARDS JH, HARNDEN DG, CAMERON AH, CROSSE VM, WOLFF OH. Lancet Apr 9;1(7128):

7 Хромосомные аномалии Числовые (геномные мут ации) Структурные (хромосомные мут ации) Полиплоидия триплоидия (3n=69) тетраплоидия (4n=92) Реципрокные транслокации (rcp) Робертсоновские транслокации (rob) Инсерции (ins) Анеуплоидия трисомия (2n+1=47) моносомия (2n-1=45) нуллисомия (2n-2=44) полисомия (47,ХХХХ) Делеции (del) Дупликации (dup) Инверсии (inv) Изохромосомы (i) Кольцевые хромосомы (r) Маркерные хромосомы (mar)

8 Кариотипирование Колхицин Кольцемид Фиксатор Карнуа ¼ Уксусная кислота ¾ метанол 2-3 последовательные фиксации Культивирование клеток Блок на стадии метафазы митоза Гипотоническая обработка Фиксация Приготовление препаратов хромосом Лимфоциты Клетки ворсин хориона Амниоциты Фибробласты М KCl «-» Наложение хромосом «+» Потеря хромосом Влажность!!! GTG RHG CBG NOR Дифференциальное окрашивание хромосом

9 Кариограмма Препарат метафазных хромосом при х100 G-окрашивание Метафазная пластинка при х1000 Кариотип: 46,ХХ 46,ХY Согласно ISCN!

10 Варианты дифференциального окрашивания

11 G-окрашивание (GTG: G-banding Trypsin Giemsa) Наиболее распространенный метод дифференциального окрашивания Легко воспроизводимый Четкий рисунок Не происходит повреждения ДНК FISH «-» слабое окрашивание концевых участков хромосом Нарушение морфологии хромосом

12 R-окрашивание (RHG: R-bands Heating Giemsa) Альтернативный GTG-методу способ дифференциальной окраски: Рисунок окраски противоположен G- рисунку Лучшее окрашивание теломер Лучшее сохранение морфологии хромосом «-» Более «капризный» метод (t, ph) менее воспроизводимый Повреждение ДНК

13 C-окрашивание (CBG: C-bands Barium hydroxide Giemsa) Метод избирательного окрашивания прицентромерного гетерохроматина: Центромерные районы всех хромосом Полиморфные гетерохроматиновые блоки (1,9,16,Y)

14 NOR-окрашивание (Nucleolar organizers) Метод избирательного окрашивания активных ядрышкообразующих районов акроцентрических хромосом (13, 14, 15, 21, 22)

15 Окрашивание с помощью Hoechst 33258, контрастирование Актиномицином D Скрининговый метод окрашивания Морфология хромосом соответствует G-окрашиванию

16 Молекулярная природа G- и R-сегментов G-сегменты: АТ-богатые Гены, определяющие тканеспецифичную дифференцировку Репликация в позднюю S-фазу LINE+ R-сегменты GC-богатые Гены «домашнего хозяйства» Репликация в ранней S-фазе SINE+,Alu+

17 Разрешение Условия приготовления препаратов хромосом Морфология хромосом Разрешение Количество сегментов Среднее разрешение, Mb >

18 Кариотипирование: «+» и «-» «-» Культура живых клеток с высокой митотической активностью Преимущественная пролиферация клеток с нормальным кариотипом (или наоборот) Невозможность анализа при отсутствии делящихся клеток «-» Относительно невысокая разрешающая способность - 10 Мв Невозможность определения микрохромосомных перестроек (делеций, дупликаций, инверсий, инсерций) «-» Качество анализа зависит от опыта исследователя и качества препаратов (морфологии хромосом, окрашивания) Невозможность определения хромосомной принадлежности генетического материала при отсутствии четкого рисунка «+» анализ структуры и количества непосредственно хромосом Выявление сбалансированных транслокаций, маркерных хромосом, мозаицизма

19 Хромосомные перестройки у супружеских пар с бесплодием Наличие сбалансированной хромосомной транслокаций у одного из партнеров приводит к систематическим невынашиваниям и ранним абортам; является причиной сниженной мужской фертильности Реципрокные транслокации 46,ХY,t(18;22)(q21.1;q12) Робертсоновские транслокации 45,XY,rob(13;14)(q10;q10) Х Y

20 Варианты сегригации хромосом у носителей Робертсоновских и реципрокных транслокаций в МI 2 варианта Оба - норма 16 возможных вариантов Один норма Один сбалансированный 6 возможных вариантов Один норма Один - сбалансированный

21 Комплексные хромосомные аномалии (complex chromosomal rearrangements - CCRs)

22 ISCN An International System for Human Cytogenetic Nomenclature 1960, Денвер: первые шаги по классификации хромосом человека (по размеру, центромерному индексу) 1963, Лондон: хромосомы разбиты на группы от A до G 1966, Чикаго: короткое плечо «p» (petit) длинное плечо «q» (m, n, o, p, q, r, s) 1971, Париж: заложены основные принципы ISCN 1977, Стокгольм: обобщение и сведение результатов всех предыдущих встреч 1978, первая ISCN 1980, Париж. 1994, Мемфис. 2004, 2008, Ванкувер Сиэтл

23 Номенклатура морфологии хромосом после дифференциального окрашивания

24 Основные принципы обозначения аномального кариотипа 50,X,+X,-Y,+10,+14,+17,+21 46,t(X;18)(p11.1;q11.2),t(Y;1)(q11.2;p13) 47,Y,t(X;13)(q27;q12),inv(10)(p13q22),r(10)(p12q25),+21 49,X,inv(X)(p21q26),+3,inv3(q21q26.2),+7,+10,-20,del(20)(q11.2),+21 50,XX,+1,+del(1)(p13),+dup(1)(q21q32),+inv(1)(p34q41),+8,-21 52,XY,.,+r,+mar

25 Гибридизация in situ «рождение» молекулярной цитогенетики: 1980-е Мечение с помощью радиоизотопов Мечение с помощью флуоресцентных красителей Fluorescence In Situ Hybridization (FISH)

26 FISH: «+» и «-» «±» Таргетный анализ: зависит от специфичности используемого ДНК-зонда «+» Разрешающая способность Kв Возможность определения микрохромосомных перестроек (делеций, дупликаций, инверсий, инсерций) «+» Более объективный метод анализа «+» Относительно легкий, быстрый и хорошо воспроизводимый метод «+» Возможность проведения анализа на культурах клеток с низкой митотической активностью, фиксированных клетках и тканях (interphase FISH)

27 Области применения FISH Преимплантационная генетическая диагностика Преимплантационный генетический скрининг (определение анеуплоидий хромосом 13,15,16,17, 18,21,22,X,Y) Преимплантационная генетическая диагностика (исследование дериватных хромосом у носителей хромосомных перестроек) Пренатальная диагностика Скрининг основных анеуплоидий некультивированных клеток амниотической жидкости Уточнение/верификац ия результатов стандартного цитогенетического исследования Постнатальная диагностика Уточнение/верификация результатов стандартного цитогенетического исследования Исследование сложных перестроек тройных и более сложных транслокаций, инсерций Определение степени мозаицизма Исследование природы маркерных хромосом Исследование хромосомных перестроек в онкогематологии Диагностика солидных опухолей Скрининг анеуплоидий сперматозоидов

28 ДНК-пробы LSI локус-специфичные пробы (locus specific identifiers) CEP центромероспецифичные пробы (chromosome enumeration probes) WCP- цельнохромосомные пробы (whole chromosome painting probes) SubTel субтеломерные пробы (хромосомоспецифичные) (subtelomere probes) Telp/Telq теломероспецифичные пробы (telomere probes)

29 Варианты FISH Metaphase FISH Interphase FISH Multi-color FISH MCB-FISH

30 LSI локус-специфичные пробы (locus specific identifiers) - Специфичны к строго определенным последовательностям ДНК Используются в диагностике: Анеуплоидий Делеций Дуликаций Инверсий Транслокаций Уточнение точек разрыва при хромосомных перестройках Микроделеционных синдромов nuc ish Xcen(DXZ1x1),Ycen(DYZ3x1),13q14(RB1x2), 18cen(D18Z1x1),21q22(D21S341x2) PGT multicolor probe mix (Abbott molecular): X blue, Y gold, 13 red, 18 aqua, 21 green.

31 Микроделеционные синдромы, выявляемые с помощью FISH Cri-du-Chat Miller-Dieker Syndrome Smith-Magenis Syndrome DiGeorge/Velo-Cardio- Facial/CATCH-22/Shprintzen Syndrome Kallman Syndrome Williams Syndrome Wolf-Hirschhorn Prader-Willi/Angelman Syndrome Анализ методом FISH с использованием пробы, специфичной к 22q11.2 (DiGeorge Syndrome critical region) - сигнал красного цвета. Сигнал зеленого цвета внутренний контроль.

32 CEP центромероспецифичные пробы (chromosome enumeration probes) - Специфичны к центромерным и прицентромерным повторам ДНК Используются в диагностике: Быстрый скрининг анеуплоидий Транслокаций Определение природы цетромеры маркерных хромосом 47, XXY Скрининг анеуплоидий хромосом сперматозоидов

33 WCP- цельнохромосомные пробы (whole chromosome painting probes) Специфичны в отношении всей хромосомы - окрашивание p- и q-плечей Используются в диагностике: Исследование хромосомных перестроек - транслокаций, инсерций Верификация, уточнение результатов кариотипирования Определение природы маркерных хромосом, дополнительного хромосомного материала

34 Multi-color FISH (спектральное кариотипирование - SKY) Одновременный анализ всех 24 хромосом Используются в диагностике: Изучение сложных межхромосомных перестроек тройных и более сложных транслокаций, инсерций Определние природы маркерных хромосом 2 n - 1

35 Multicolor banding MCB FISH Изучение внутрихромосомных перестроек: Инверсий Инсерций Делеций Дупликаций Уточнение точек разрывов при межхромосомных перестройках

36 MCB-FISH для уточнения точек разрыва при комплексной хромосомной перестройке (CCR) 46,XX,der(4),der(5),der(6)

37 G-banding Стандартный (сег.) Высокого разрешения (1000 сег.) FISH Аналит. разрешение Числ.хр. нарушения Структурные перестройки сбл несбл CNV LOH Мозаицизм 5-10 Mb > 6% 1-2 Mb > 6% LSI-пробы до 100 kb % Array-CGH Human CGH 44K Human CGH 180K Human CGH +SNP, 180K Human CGH +SNP, 400K kb > 20% kb > 20% kb > 20% kb > 20%

38 Приказ Минздрава РФ от N 316 (ред. от) "О дальнейшем развитии медико-генетической службы Министерства здравоохранения Российской Федерации" Основным видом деятельности учреждений МГС является профилактика врожденной и наследственной патологии путем организации и проведения ретрои проспективного медико-генетического консультирования, пренатальной диагностики, преклинической диагностики у новорожденных наследственных болезней, направление больных на лечение и диспансерное наблюдение семей с наследственной патологией. Уровни организации МГС (Приложение 1, п.2): районный, городской региональный (областной, краевой, республиканский) межрегиональный Федеральный (МГЦ) Задачи подразделений МГК (Приложение 2) Регламентация работы персонала МГК (Приложение 2) Пример штатного расписания МГК (Приложение 2) Перечень основного оборудования и реактивов (Приложение 3) Нормативы расхода спиртов (Приложение 3)

39 Приказ от 15 ноября 2012 г. N 917н «Об утверждении порядка оказания медицинской помощи больным с врожденными и (или) наследственными заболеваниями» Правила организации деятельности медико-генетической консультации (центра) (Приложение 1) Рекомендуемые штатные нормативы (Приложение 2) Стандарт оснащения цитогенетической лаборатории (с возможностью проведения FISH) (Приложение 3) Стандарт оснащения лаборатории молекулярно-генетической диагностики (Приложение 3) Приказ Минздрава России от N 457 "О совершенствовании пренатальной диагностики в профилактике наследственных и врожденных заболеваний у детей" Инструкция по проведению инвазивной диагностики плода и генетического исследования биоптатов клеток (Приложение 3)

40 Литература R.J. McKinlay Gardner, Grant R. Sutherland and Lisa G. Shaffer (2012).Chromosome abnormalities and genetic counseling.4th ed. Oxford University Press, New York. С. Г. Ворсанова, Ю. Б. Юров В. Н. Чернышов Медицинская цитогенетика Медпрактика-М, 2006 Баранов В.С., Кузнецова Т. В. Цитогенетика эмбрионального развития человека: Научнопрактические аспекты. СПб: Издательство Н-Л, с

ЦИТОГЕНЕТИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ «Кариотип» это совокупность морфологических особенностей полного хромосомного набора единичной клетки. Кариотипирование - анализ числа и структуры метафазных хромосом из клеток

Кариотипирование супружеской пары важный диагностический шаг при проблемах в репродуктивной сфере А.А. Бровко, клиника «Исида» Одним из основных тестов, предназначенных для супружеских пар при проблемах

ПРАКТИЧЕСКОЕ ПРИМЕНЕНИЕ ХРОМОСОМНОГО АНАЛИЗА (КАРИОТИПИРОВАНИЯ) Хромосомный набор человека Как известно, хромосомы находятся в ядре клетки и состоят из нуклеиновых кислот и белков. Один из типов нуклеиновых

Занятие 6. Изменчивость и ее значение в онтогенезе человека. Фенотипическая и генотипическая изменчивость. Генный, хромосомный и геномный уровни нарушения генетического аппарата. Генные болезни как результат

Основные показания для ПГД - Пары, у которых в анамнезе были случаи рождения детей с наследственной и врожденной патологией; - пары, в кариотипе которых имеются сбалансированные хромосомные аберрации;

Молекулярная диагностика онкогематологических заболеваний Филатова Людмила Менеджер по продукции К.б.н Сравнительные характеристики методик Метод Морфология FISH Проточная цитофлуориметри я ОТ-ПЦР (транслокации)

Ò. Â. Îñàä óê, Ê. À. Ìîññý ÈÑÑËÅÄÎÂÀÍÈÅ ÂÛÑÎÊÎÈÍÔÎÐÌÀÒÈÂÍÛÕ ÄÍÊ-ÌÀÐÊÅÐÎÂ ÄËß ÄÈÀÃÍÎÑÒÈÊÈ ÈÑËÎÂÛÕ ÀÍÎÌÀËÈÉ ÕÐÎÌÎÑÎÌ ÅËÎÂÅÊÀ ÃÓ «Ðåñïóáëèêàíñêèé íàó íî-ïðàêòè åñêèé öåíòð «Ìàòü è äèòÿ»» èñëîâûå àíîìàëèè

ХРОМОСОМНЫ Е БОЛЕЗНИ Хромосомные болезни группа врождённых наследственных заболеваний, характеризующихся множественными врождёнными пороками развития. В основе лежат хромосомные или геномные мутации. История

ПГС (ПГТ-А) эмбрионов 5 дня развития методом NGS: открывшиеся возможности и сложности М.А. Стрижова, Р.В. Васильев, С.В. Вяткина, М.Н. Павлова, Н.В. Андреева, К.О. Годунов, М.В. Кречмар, Д.А. Лобзева,

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РЕСПУБЛИКИ БЕЛАРУСЬ УТВЕРЖДАЮ Первый заместитель министра Р.А. Часнойть 12 февраля 2010 г. Регистрационный 118-1109 МОЛЕКУЛЯРНО-ЦИТОГЕНЕТИЧЕСКИЙ МЕТОД ФЛУОРЕСЦЕНТНОЙ IN SITU

ЦИТОГЕНЕТИЧЕСКАЯ ДИАГНОСТИКА: ОСОБЕННОСТИ ПОСТНАТАЛЬНОГО КАРИОТИПИРОВАНИЯ ВВЕДЕНИЕ В настоящее время не вызывает сомнений постулат, что ни одна врачебная специальность не может обойтись без знаний основ

ФЕДЕРАЛЬНОЕ ГОСУДАРСТВЕННОЕ ОБРАЗОВАТЕЛЬНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ ВЫСШЕГО ОБРАЗОВАНИЯ «БЕЛГОРОДСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НАЦИОНАЛЬНЫЙ ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ» (НИУ «БелГУ») МЕДИЦИНСКИЙ ИНСТИТУТ МЕДИЦИНСКИЙ КОЛЛЕДЖ

ЗАКЛЮЧЕНИЕ ДИССЕРТАЦИОННОГО СОВЕТА Д 001.016.01 НА БАЗЕ ФЕДЕРАЛЬНОГО ГОСУДАРСТВЕННОГО БЮДЖЕТНОГО НАУЧНОГО УЧРЕЖДЕНИЯ «МЕДИКО-ГЕНЕТИЧЕСКИЙ НАУЧНЫЙ ЦЕНТР» ПО ДИССЕРТАЦИИ НА СОИСКАНИЕ УЧЕНОЙ СТЕПЕНИ ДОКТОРА

1.Пояснительная записка Рабочая программа предметного курса по биологии разработана на основе программы Фроловой Г. Н., Ходиковой Т. Ф. (сборник. Биология. 10-11 классы. Профильное обучение. Программы

1 ЗАКЛЮЧЕНИЕ ДИССЕРТАЦИОННОГО СОВЕТА Д 001.016.01 НА БАЗЕ ФЕДЕРАЛЬНОГО ГОСУДАРСТВЕННОГО БЮДЖЕТНОГО УЧРЕЖДЕНИЯ «МЕДИКО-ГЕНЕТИЧЕСКИЙ НАУЧНЫЙ ЦЕНТР» РОССИЙСКОЙ АКАДЕМИИ МЕДИЦИНСКИХ НАУК ПО ДИССЕРТАЦИИ НА

ГБОУ СПО «КИСЛОВОДСКИЙ МЕДИЦИНСКИЙ КОЛЛЕДЖ» МИНЗДРАВА РОССИИ РАБОЧАЯ ПРОГРАММА УЧЕБНОЙ ДИСЦИПЛИНЫ 0П.04 Генетика человека с основами медицинской генетики по специальности: 34.0.01 Сестринское дело Кисловодск,

Координация различных методов генетического анализа в клинической практике Д.б.н. Стрельников Владимир Викторович Зав. лаб. эпигенетики ФГБНУ "МГНЦ" Проф., кафедра молекулярной и клеточной генетики РНИМУ

P A R T N E R " S P R E S E N T A T I O N МОЛЕКУЛЯРНО- ГЕНЕТИЧЕСКИЙ МЕТОД Вороная Ю.М 1мед 1группа S E C T I O N F O U R МОЛЕКУЛЯРНО - ГЕНЕТИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ Большая и разнообразная группа методов, предназначенная

Маленькая жёлтая книжка Справочник по редким хромосомным отклонениям Составители: доктор Беверли Сёрл (бакалавр наук (BSc, HONS) по специальности «Биология», PhD, член Королевского биологического общества

1. Фонд оценочных средств для проведения промежуточной аттестации обучающихся по дисциплине (модулю): Общие сведения 1. Кафедра СПиСП 2. Направление подготовки 44.03.03 Специальное (дефектологическое)образование

1 Рабочая программа учебной дисциплины разработана на основе Федерального государственного образовательного стандарта (далее ФГОС) по специальности (специальностям) среднего профессионального образования

На правах рукописи Миньженкова Марина Евгеньевна МЕТАФАЗНАЯ СРАВНИТЕЛЬНАЯ ГЕНОМНАЯ ГИБРИДИЗАЦИЯ В ДИАГНОСТИКЕ ХРОМОСОМНОГО ДИСБАЛАНСА 03.02.07 «генетика» АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени

ПРЕИМПЛАНТАЦИОННОЕ ГЕНЕТИЧЕСКОЕ ТЕСТИРОВАНИЕ ХРОМОСОМНЫХ АНОМАЛИЙ: СПЕКТР И ЧАСТОТА ВЫЯВЛЯЕМОЙ ПАТОЛОГИИ Е.В. Мусатова, Я.В. Софронова, Р.А. Биканов, В.С. Каймонов, Е.А. Померанцева Санкт-Петербург, 2017

Пренатальная диагностика врожденных нарушений развития ребенка Гл.специалист МЗ РТ по медицинской генетике Вафина З.И. Генетический груз врожденной и наследственной патологии Всего 40-70 на 1000 живорожденных

ИНФОРМИРОВАННОЕ СОГЛАСИЕ НА ОКАЗАНИЕ УСЛУГ ПО ПРЕИМПЛАНТАЦИОННОЙ ГЕНЕТИЧЕСКОЙ ДИАГНОСТИКЕ ЭМБРИОНОВ (ПГД) Настоящее добровольное согласие составлено в соответствии Федеральным законом РФ об основах охраны

Генетика Прогноз эволюции болезни Пренатальная диагностика Новые методы диагностики Понимание патогенеза Зачем нужны врачу генетические знания? Предсимптоматическая диагностика Планирование семьи Клеточная

2 СОДЕРЖАНИЕ Стр. 1. ПАСПОРТ ПРОГРАММЫ УЧЕБНОЙ ДИСЦИПЛИНЫ 4 2. СТРУКТУРА И СОДЕРЖАНИЕ УЧЕБНОЙ ДИСЦИПЛИНЫ 3. УСЛОВИЯ РЕАЛИЗАЦИИ ПРОГРАММЫ УЧЕБНОЙ ДИСЦИПЛИНЫ 4. КОНТРОЛЬ И ОЦЕНКА РЕЗУЛЬТАТОВ ОСВОЕНИЯ УЧЕБНОЙ

Медицинский колледж ФГБОУ ВО ДГМУ Минздрава России РАБОЧАЯ ПРОГРАММА УЧЕБНОЙ ДИСЦИПЛИНЫ 0П.04 Генетика человека с основами медицинской генетики Специальность 31.0.0 Акушерское дело Махачкала, 017 г. 1

Опыт централизации лабораторных исследований при онкогематологической патологии на базе бюджетного учреждения здравоохранения Омской области «Клинический диагностический центр». Комплексный подход к диагностике

2 Разработчик программы: В.В.Радыгина, доцент кафедры педагогики и психологии непрерывного образования факультета переподготовки специалистов образования ИПКиП БГПУ, кандидат биологических наук, доцент.

1 Рабочая программа учебной дисциплины разработана на основе Федерального государственного образовательного стандарта среднего профессионального образования по специальности 34.02.01 Сестринское дело Организация

ДЕПАРТАМЕНТ СМОЛЕНСКОЙ ОБЛАСТИ ПО ЗДРАВООХРАНЕНИЮ ПРИКАЗ О порядке мероприятий по пренатальной (дородовой) диагностике нарушений развития ребенка в Смоленской области В целях повышения эффективности дородовой

Комитет по здравоохранению Санкт-Петербурга Санкт-Петербургское государственное бюджетное профессиональное образовательное учреждение «Медицинский колледж 1» УТВЕРЖДАЮ РАБОЧАЯ ПРОГРАММА УЧЕБНОЙ ДИСЦИПЛИНЫ

Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования «Санкт-Петербургский политехнический университет Петра Великого» Институт физики, нанотехнологий и телекоммуникаций

КАРИОЛОГИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ НА ПРИМЕРЕ ПОЛИТЕННЫХ ХРОМОСОМ ХИРОНОМИД Сценарий учебного видеофильма из видеокомплекса «Видеопрактика по цитологии в НГУ» В. В. Голыгина, О. В. Ермолаева, А. Д. Брошков Аннотация.

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РЕСПУБЛИКИ БЕЛАРУСЬ УТВЕРЖДАЮ Первый заместитель министра Д.Л. Пиневич 16.03.2011 Регистрационный 124-1110 МЕДИКО-ГЕНЕТИЧЕСКОЕ КОНСУЛЬТИРОВАНИЕ ПРИ ВРОЖДЕННЫХ ПОРОКАХ МОЧЕВЫДЕЛИТЕЛЬНОЙ

Современные подходы к генетической диагностике наследственных заболеваний в акушерстве и гинекологии. Константин Шевченко ОАО «Институт Стволовых Клеток Человека» «редкие болезни редки до тех пор, пока

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ КАЛУЖСКОЙ ОБЛАСТИ ПРИКАЗ * ^ Об организации работы консультативно - диагностического отделения, кабинета катамнеза и медико - генетической консультации перинатального центра

Методы идентификации хромосом. Хромосомные перестройки. Лекция 3. Монохромное окрашивание хромосом. Дифференциальное окрашивание хромосом. Возможности идентификации хромосом на протяжении клеточного цикла

Окружной кабинет пренатальной диагностики нарушений внутриутробного развития ребенка 1. Зачем Вас посылают в окружной кабинет? Данный кабинет осуществляет диагностику в 11-13 нед.+ 6 дней беременности

Genetico.ru 8 800 250 90 75 (звонок по России бесплатный) ПРЕИМПЛАНТАЦИОННАЯ ГЕНЕТИЧЕСКАЯ ДИАГНОСТИКА Москва, ул. Губкина, д. 3, корп. 1 Лицензия ЛО-77-01-013305 обследование эмбриона на наследственные

Кариотип человека Методы изучения кариотипа Получение хромосомных препаратов: - выделение митотических клеток - лизис клеток в гипотонических условиях и разбрызгивание хромосом - окраска препаратов Флюоресцентная

Приложение к приказу СПб ГКУЗ МГЦ от 0626 5/Ц УТВЕРЖДЕН приказом от 0626 г. 5/Ц Комитет по здравоохранению Санкт-Петербурга Санкт-Петербургское государственное казенное учреждение здравоохранения "Диагностический

Неинвазивное пренатальное тестирование (НИПТ) основанное на Одно- Нуклеотидных Полиморфизмах (ОНП) Внеклеточная ДНК (cfdna) внк ДНК происходит из апоптотических клеток, получаемых из: Крови матери Адипоциты

По итогам обсуждения принято следующее заключение: диссертационная работа Черных В.Б. «Аномалии половых хромосом при нарушениях формирования пола и репродукции человека» посвящена актуальной проблеме исследованию

Неинвазивная пренатальная молекулярно-генетическая диагностика плода на трисомии 13, 18 и 21 хромосом методом секвенирования нового поколения (NGS) и расчет Z- распределения по ДНК, выделенной из материнской

Игорь Иванович Гузов, к. м. н Генеральный директор Клиники и лаборатории ЦИР Роль комплексного пренатального скрининга в выявлении групп риска развития патологии плода Санкт-Петербург 14 марта 2008 http://www.cironline.ru

РАССМОТРЕНО На заседании цикловой комиссии общепрофессиональных дисциплин Протокол от Председатель Т.Н. Иванова (подпись) (И.О.Фамилия) УТВЕРЖДАЮ Директор КГБОУ СПО В.М. Савельев (подпись) (дата) Комплект

На правах рукописи ШИЛОВА НАДЕЖДА ВЛАДИМИРОВНА СОВЕРШЕНСТВОВАНИЕ ПОДХОДОВ К ДИАГНОСТИКЕ ХРОМОСОМНЫХ АНОМАЛИЙ В РАМКАХ ПЕРСОНАЛИЗИРОВАННОЙ МЕДИЦИНЫ 03.02.07 генетика АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание

Антенатальная гибель плода: полногеномный CNV- анализ ДНК из срезов архивных тканей плаценты и пупочной вены и клинико-морфологические корреляции Stillbirth: Genome-wide copy number variation profiling

Министерство здравоохранения Российской Федерации Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования «ИРКУТСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ МЕДИЦИНСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ» (ФГБОУ ВО ИГМУ

Значение цитогенетических исследований для оценки радиационной опасности космических полетов Снигирева Г.П. 1, Новицкая Н.Н. 1, Федоренко Б.С. 2 1 ФГУ «Российский Научный Центр Рентгенорадиологии» Минздравсоцразвития,

Планирование семьи с учётом генетических аномалий Сердюк А.А. Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования «Тюменский государственный медицинский университет» Министерства

РАБОЧАЯ ПРОГРАММА По биологии для 10 класса среднего общего образования Элективный курс Тема: «Генетика человека» учителя биологии Сафроновой Екатерины Владимировны Екатеринбург 2016 г. Пояснительная записка.

1. ПАСПОРТ РАБОЧЕЙ ПРОГРАММЫ УЧЕБНОЙ ДИСЦИПЛИНЫ Генетика человека с основами медицинской генетики 1.1. Область применения программы Рабочая программа учебной дисциплины является частью основной профессиональной

Искусственные хромосомы: проблемы и перспективы С.А.Демаков Институт химической биологии и фундаментальной медицины СО РАН, Отдел молекулярной и клеточной биологии Новосибирск -2010 Организация хромосомы

Новые молекулярно-генетические технологии в лабораторной практике. Дьявол прячется в деталях. Филатова Людмила К.б.н. Владивосток, РАМЛД, 2015 Процедура Идеальная процедура анализа в анализа в молекулярной

СОДЕРЖАНИЕ стр. 1 ПАСПОРТ ФОНДА ОЦЕНОЧНЫХ СРЕДСТВ 4 2 ОЦЕНКА ОСВОЕНИЯ ДИСЦИПЛИНЫ 6 2.1 ПРИМЕРНЫЕ ЗАДАНИЯ ИЛИ ИНЫЕ МАТЕРИАЛЫ 9 НЕОБХОДИМЫЕ ДЛЯ ТЕКУЩЕГО КОНТРОЛЯ УСПЕВАЕМОСТИ ПО ДИСЦИПЛИНЕ 2.2 ПРИМЕРНЫЕ

Тема 4. 7. Спермато- и оогенез. Хромосомная теория наследственности. Хромосомные перестройки в мейозе. Мейоз у полиплоидов. Сперматогенез Сперматогонии Митозы Стадия размножения Стадия роста Сперматоциты

УТВЕРЖДАЮ Зав. кафедрой молекулярной биологии и генетики, д.м.н. Топорков А.В. протокол 1 от «28» августа 2015 г. Календарно - тематический план лекций по дисциплине «Методы и объекты генетического анализа»

Мы беседуем с главным специалистом по медицинской генетике комитета по здравоохранению Санкт-Петербурга, членом-корреспондентом РАМН, профессором Владиславом Сергеевичем Барановым. Пройти генетический

1 ПРОЕКТ Профессиональный стандарт 1. Общие положения 1. Профессиональный стандарт предназначен для: абитуриентов, осуществляющих выбор своей профессиональной деятельности; работников системы здравоохранения

Современная генетика и новые репродуктивные технологии. Modern genetics and new reproductive technologies. Преподаватели: Ким Александр Иннокентьевич (д.б.н., профессор, кафедры генетики) координатор и

Краткий ответ : Метод флюоресцентной гибридизации in situ (FISH - fluorescence in situ hybridization) включает применение уникальных нуклеотидных последовательностей ДНК в качестве зонда для поиска нужных последовательностей ДНК в материале, полученном от пациента. Метод основан на комплементарном связывании ДНК-зонда с ДНК метафазных хромосом или интерфазных клеток. ДНК-зонд и исследуемую ДНК денатурируют, образуется одноцепочная ДНК. ДНК-зонд добавляют к препарату хромосом, инкубируют определенное время. Присутствие или отсутствие меченного флюорохромом зонда в составе ДНК после гибридизации определяется при исследовании хромосом с помощью флюоресцентной микроскопии.

Развёрнутый ответ : Метод флуоресцентной гибридизации in situ позволяет выявлять индивидуальные хромосомы или их отдельные участки на препаратах метафазных хромосом или интерфазных ядрах на основе комплементарного взаимодействия ДНК-зонда, конъюгированного с флуоресцентной меткой и искомого участка на хромосоме. Для визуализации на хромосоме пептидно-нуклеиновых соединений применяют PNA-зонды на основе белкового продукта.
Метод основан на комплементарном связывании ДНК-зонда с ДНК метафазных хромосом или интерфазных клеток и включает следующие этапы:
1. Денатурация двухцепочечной ДНК зонда и ДНК мишени до одноцепочечных под воздействием высокой температуры или химических агентов.
2. Гибридизация ДНК-зонда с ДНК-мишенью по принципу комплементарности с образованием двухцепочечной гибридной молекулы
3. Постгибридизационная отмывка для удаления негибридизовавшегося ДНК-зонда
4. Анализ гибридизационных сигналов с люминисцентном микроскопе

Преимущества метода молекулярно-генетической диагностики FISH включают быстрый анализ большого числа клеток, высокую чувствительность и специфичность, возможность исследовать некультивируемые и неделящиеся клетки.
Недостатки метода заключаются в невозможности получить информацию о физическом состоянии исследуемой ДНК или участка хромосомы.
FISH применяют в пренатальной молекулярно-генетической диагностике и для характеристики опухолей; в педиатрической практике его используют, как правило, для идентификации субмикроскопических делеций, ассоциированных со специфическими пороками развития. Синдромы, в основе которых лежат микроделеции, раньше считались заболеваниями неизвестной этиологии, так как хромосомные делеции и перестройки, вызывающие развитие этих заболеваний, обычно не визуализируются при традиционных методах хромосомного анализа. Такие мелкие делеции в специфических участках хромосом можно с большой точностью выявить методом FISH. К заболеваниям, обусловленным субмикроскопическими делециями, относятся синдромы Прадера-Вилли, Ангельмана, Вильямса, Миллера-Дикера, Смит-Мадженис и велокардиофациальный синдром . FISH облегчает диагностику этих синдромов в нетипичных случаях, особенно в младенческом возрасте, когда еще отсутствуют многие диагностически значимые признаки заболевания. Применение этого метода молекулярно-генетической диагностики целесообразно также в подростковом и во взрослом возрасте, когда типичные клинические признаки заболевания, характерные для детского возраста, претерпевают изменения.

121. ДНК-зонды. Их применение в определении наследственных заболеваний.

Краткий обзор

ДНК – зонд - это короткий фрагмент ДНК, конъюгированный с флуоресцеином, ферментно, или радиоактивным изотопом, который используется для гибридизации с комплементарным участком молекулы ДНК – мишени.

Основная часть

Системы ДНК-диагностики

Информация о всем многообразии свойств организма заключена в его генетическом материале. Так, патогенность бактерий определяется наличием у них специфического гена или набора генов, а наследственное генетическое заболевание возникает в результате повреждения определенного гена. Сегмент ДНК, детерминирующий данный биологический признак, имеет строго определенную нуклеотидную последовательность и может служить диагностическим маркером.

В основе многих быстрых и надежных диагностических методов лежит гибридизация нуклеиновых кислот - спаривание двух комплементарных сегментов разных молекул ДНК. Процедура в общих чертах состоит в следующем.

1. Фиксация одноцепочечной ДНК-мишени на мембранном фильтре.

2. Нанесение меченой одноцепочечной ДНК-зонда, которая при определенных условиях (температуре и ионной силе) спаривается с ДНК-мишенью.

3. Промывание фильтра для удаления избытка несвязавшейся меченой ДНК-зонда.

4. Детекция гибридных молекул зонд/мишень.

В диагностических тестах, основанных на гибридизации нуклеиновых кислот, ключевыми являются три компонента: ДНК-зонд, ДНК-мишень и метод детекции гибридизационного сигнала. Система детекции должна быть в высшей степени специфичной и высокочувствительной.

*Флуоресцеин (диоксифлуоран, уранин А) - органическое соединение, флуоресцентный краситель. В аналитической химии флуоресцеин используется в качестве люминесцентного кислотно-основного индикатора. В биохимии и молекулярной биологии изотиоцианатные производные флуоресцеина в качестве биологических красок для определения антигенов и антител.

* Детекция – это обнаружение, выявление, нахождение чего либо.

*конъюгирование=сопряжение

*Если в одной "пробирке" провести плавление и отжиг смеси ДНК, например, человека и мыши, то некоторые участки цепей ДНК мыши будут воссоединяться с комплементарными участками цепей ДНК человека с образованием гибридов. Число таких участков зависит от степени родства видов. Чем ближе виды между собой, тем больше участков комплементарности нитей ДНК. Это явление называется гибридизация ДНК-ДНК.

122. Методы и условия применения прямой ДНК-диагностики.

Краткий обзор:

Целью прямой диагностики является идентификация мутантных аллелей (нарушения в первичной нуклеотидной последовательности ДНК, мутации и их типы).

Недостатком метода прямой ДНК-диагностики является необходимость знания точной локализации гена и спектра его мутаций. Методы прямой ДНК-диагностики показаны для таких заболеваний, как фенилкетонурия (мутация R408W), муковисцидоз - (наиболее частая мутация delF508), хорея Гентингтона (экспансия тринуклеотидных повторов-CTG-повторы) и др.

Полный ответ:

С помощью прямых методов выявляются нарушения в первичной нуклеотидной последовательности ДНК (мутации и их типы). Прямые методы отличаются точностью, достигающей почти 100 %. Однако на практике указанные методы могут применяться при определенных условиях:

1) известной цитогенетической локализации гена, ответственного за развитие наследственного заболевания,

2) должен быть клонированным ген заболевания и известна его нуклеотидная последовательность.

Целью прямой диагностики является идентификация мутантных аллелей (нарушения в первичной нуклеотидной последовательности ДНК, мутации и их типы). Высокая точность метода прямой ДНК-диагностики в большинстве случаев не требует ДНК-анализа всех членов семьи, так как выявление мутации в соответствующем гене позволяет почти со 100-процентной точностью подтвердить диагноз и определить генотип всех членов семьи больного ребенка, включая гетерозиготных носителей.

Недостатком метода прямой ДНК-диагностики является необходимость знания точной локализации гена и спектра его мутаций.

Методы прямой ДНК-диагностики показаны для таких заболеваний, как фенилкетонурия (мутация R408W), муковисцидоз - (наиболее частая мутация delF508), хорея Гентингтона (экспансия тринуклеотидных повторов-CTG-повторы) и др.

Однако к настоящему времени гены многих заболеваний не картированы, неизвестна их экзонно-интронная организация, и многие наследственные болезни отличаются выраженной генетической гетерогенностью, что не позволяет в полной мере использовать прямые методы ДНК-диагностики. Поэтому информативность метода прямой ДНК-диагностики широко варьирует. Так, при диагностике хореи Гентингтона, ахондроплазии она составляет 100 %, при фенилкетонурии, муковосицидозе, адреногенитальном синдроме - от 70 до 80 %, а при болезни Вильсона-Коновалова и миопатии Дюшенна/Бекера - 45-60 %. В связи с этим используются косвенные методы молекулярно-генетической диагностики наследственных болезней.

Руководитель направления
„Онкогенетика“

Жусина
Юлия Геннадьевна

Окончила педиатрический факультет Воронежского государственного медицинского университета им. Н.Н. Бурденко в 2014 году.

2015 - интернатура по терапии на базе кафедры факультетской терапии ВГМУ им. Н.Н. Бурденко.

2015 - сертификационный курс по специальности «Гематология» на базе Гематологического научного центра г. Москвы.

2015-2016 – врач терапевт ВГКБСМП №1.

2016 - утверждена тема диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук «изучение клинического течения заболевания и прогноза у больных хронической обструктивной болезнью легких с анемическим синдромом». Соавтор более 10 печатных работ. Участник научно-практических конференций по генетике и онкологии.

2017 - курс повышения квалификации по теме: «интерпретация результатов генетических исследований у больных с наследственными заболеваниями».

С 2017 года ординатура по специальности «Генетика» на базе РМАНПО.

Руководитель направления
„Генетика“

Канивец
Илья Вячеславович

Канивец Илья Вячеславович, врач-генетик, кандидат медицинских наук, руководитель отдела генетики медико-генетического центра Геномед. Ассистент кафедры медицинской генетики Российской медицинской академии непрерывного профессионального образования.

Окончил лечебный факультет Московского государственного медико-стоматологического университета в 2009 году, а в 2011 – ординатуру по специальности «Генетика» на кафедре Медицинской генетики того же университета. В 2017 году защитил диссертацию на соискание ученой степени кандидата медицинских наук на тему: Молекулярная диагностика вариаций числа копий участков ДНК (CNVs) у детей с врожденными пороками развития, аномалиями фенотипа и/или умственной отсталостью при использовании SNP олигонуклеотидных микроматриц высокой плотности»

C 2011-2017 работал врачом-генетиком в Детской клинической больнице им. Н.Ф. Филатова, научно-консультативном отделе ФГБНУ «Медико-генетический научный центр». С 2014 года по настоящее время руководит отделом генетики МГЦ Геномед.

Основные направления деятельности: диагностика и ведение пациентов с наследственными заболеваниями и врожденными пороками развития, эпилепсией, медико-генетическое консультирование семей, в которых родился ребенок с наследственной патологией или пороками развития, пренатальная диагностика. В процессе консультации проводится анализ клинических данных и генеалогии для определения клинической гипотезы и необходимого объема генетического тестирования. По результатам обследования проводится интерпретация данных и разъяснение полученной информации консультирующимся.

Является одним из основателей проекта «Школа Генетики». Регулярно выступает с докладами на конференциях. Читает лекции для врачей генетиков, неврологов и акушеров-гинекологов, а также для родителей пациентов с наследственными заболеваниями. Является автором и соавтором более 20 статей и обзоров в российских и зарубежных журналах.

Область профессиональных интересов – внедрение современных полногеномных исследований в клиническую практику, интерпретация их результатов.

Время приема: СР, ПТ 16-19

Руководитель направления
„Неврология“

Шарков
Артем Алексеевич

Шарков Артём Алексеевич – врач-невролог, эпилептолог

В 2012 году обучался по международной программе “Oriental medicine” в университете Daegu Haanu в Южной Корее.

С 2012 года - участие в организации базы данных и алгоритма для интерпретации генетических тестов xGenCloud (http://www.xgencloud.com/, Руководитель проекта - Игорь Угаров)

В 2013 году окончил Педиатрический факультет Российского национального исследовательского медицинского университета имени Н.И. Пирогова.

C 2013 по 2015 год обучался в клинической ординатуре по неврологии в ФГБНУ «Научный центр неврологии».

С 2015 года работает неврологом, научным сотрудником в Научно- исследовательском клиническом институте педиатрии имени академика Ю.Е. Вельтищева ГБОУ ВПО РНИМУ им. Н.И. Пирогова. Также работает врачом- неврологом и врачом лаборатории видео-ЭЭГ мониторинга в клиниках «Центр эпилептологии и неврологии им. А.А.Казаряна» и «Эпилепси-центр».

В 2015 году прошел обучение в Италии на школе «2nd International Residential Course on Drug Resistant Epilepsies, ILAE, 2015».

В 2015 году повышение квалификации - «Клиническая и молекулярная генетика для практикующих врачей», РДКБ, РОСНАНО.

В 2016 году повышение квалификации - «Основы молекулярной генетики» под руководством биоинформатика, к.б.н. Коновалова Ф.А.

С 2016 года - руководитель неврологического направления лаборатории "Геномед".

В 2016 году прошел обучение в Италии на школе «San Servolo international advanced course: Brain Exploration and Epilepsy Surger, ILAE, 2016».

В 2016 году повышение квалификации - "Инновационные генетические технологии для врачей", "Институт лабораторной медицины".

В 2017 году – школа «NGS в медицинской генетике 2017», МГНЦ

В настоящее время проводит научные исследования в области генетики эпилепсии под руководством профессора, д.м.н. Белоусовой Е.Д. и профессора, д.м.н. Дадали Е.Л.

Утверждена тема диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук "Клинико-генетические характеристики моногенных вариантов ранних эпилептических энцефалопатий".

Основные направления деятельности – диагностика и лечение эпилепсии у детей и взрослых. Узкая специализация – хирургическое лечение эпилепсии, генетика эпилепсий. Нейрогенетика.

Научные публикации

Шарков А., Шаркова И., Головтеев А., Угаров И. «Оптимизация дифференциальной диагностики и интерпретации результатов генетического тестирования экспертной системой XGenCloud при некоторых формах эпилепсий». Медицинская генетика, № 4, 2015, с. 41.
*
Шарков А.А., Воробьев А.Н., Троицкий А.А., Савкина И.С., Дорофеева М.Ю., Меликян А.Г., Головтеев А.Л. "Хирургия эпилепсии при многоочаговом поражении головного мозга у детей с туберозным склерозом." Тезисы XIV Российского Конгресса «ИННОВАЦИОННЫЕ ТЕХНОЛОГИИ В ПЕДИАТРИИ И ДЕТСКОЙ ХИРУРГИИ». Российский Вестник Перинатологии и Педиатрии, 4, 2015. - с.226-227.
*
Дадали Е.Л., Белоусова Е.Д., Шарков А.А. "Молекулярно-генетические подходы к диагностике моногенных идиопатических и симптоматических эпилепсий". Тезис XIV Российского Конгресса «ИННОВАЦИОННЫЕ ТЕХНОЛОГИИ В ПЕДИАТРИИ И ДЕТСКОЙ ХИРУРГИИ». Российский Вестник Перинатологии и Педиатрии, 4, 2015. - с.221.
*
Шарков А.А., Дадали Е.Л., Шаркова И.В. «Редкий вариант ранней эпилептической энцефалопатии 2 типа, обусловленной мутациями в гене CDKL5 у больного мужского пола». Конференция "Эпилептология в системе нейронаук". Сборник материалов конференции: / Под редакцией: проф. Незнанова Н.Г., проф. Михайлова В.А. СПб.: 2015. – с. 210-212.
*
Дадали Е.Л., Шарков А.А., Канивец И.В., Гундорова П., Фоминых В.В., Шаркова И,В,. Троицкий А.А., Головтеев А.Л., Поляков А.В. Новый аллельный вариант миоклонус-эпилепсии 3 типа, обусловленный мутациями в гене KCTD7// Медицинская генетика.-2015.- т.14.-№9.- с.44-47
*
Дадали Е.Л., Шаркова И.В., Шарков А.А., Акимова И.А. «Клинико-генетические особенности и современные способы диагностики наследственных эпилепсий». Сборник материалов «Молекулярно-биологические технологии в медицинской практике» / Под ред. чл.-корр. РАЕН А.Б. Масленникова.- Вып. 24.- Новосибирск: Академиздат, 2016.- 262: с. 52-63
*
Белоусова Е.Д., Дорофеева М.Ю., Шарков А.А. Эпилепсия при туберозном склерозе. В "Болезни мозга, медицинские и социальные аспекты" под редакцией Гусева Е.И., Гехт А.Б., Москва; 2016; стр.391-399
*
Дадали Е.Л., Шарков А.А., Шаркова И.В., Канивец И.В., Коновалов Ф.А., Акимова И.А. Наследственные заболевания и синдромы, сопровождающиеся фебрильными судорогами: клинико-генетические характеристики и способы диагностики. //Русский Журнал Детской Неврологии.- Т. 11.- №2, с. 33- 41. doi: 10.17650/ 2073-8803- 2016-11- 2-33- 41
*
Шарков А.А., Коновалов Ф.А., Шаркова И.В., Белоусова Е.Д., Дадали Е.Л. Молекулярно-генетические подходы к диагностике эпилептических энцефалопатий. Сборник тезисов «VI БАЛТИЙСКИЙ КОНГРЕСС ПО ДЕТСКОЙ НЕВРОЛОГИИ» / Под редакцией профессора Гузевой В.И. Санкт- Петербург, 2016, с. 391
*
Гемисферотомии при фармакорезистентной эпилепсии у детей с билатеральным поражением головного мозга Зубкова Н.С., Алтунина Г.Е., Землянский М.Ю., Троицкий А.А., Шарков А.А., Головтеев А.Л. Сборник тезисов «VI БАЛТИЙСКИЙ КОНГРЕСС ПО ДЕТСКОЙ НЕВРОЛОГИИ» / Под редакцией профессора Гузевой В.И. Санкт-Петербург, 2016, с. 157.
*
*
Статья: Генетика и дифференцированное лечение ранних эпилептических энцефалопатий. А.А. Шарков*, И.В. Шаркова, Е.Д. Белоусова, Е.Л. Дадали. Журнал неврологии и психиатрии, 9, 2016; Вып. 2doi: 10.17116/jnevro 20161169267-73
*
Головтеев А.Л., Шарков А.А., Троицкий А.А., Алтунина Г.Е., Землянский М.Ю., Копачев Д.Н., Дорофеева М.Ю. "Хирургическое лечение эпилепсии при туберозном склерозе" под редакцией Дорофеевой М.Ю., Москва; 2017; стр.274
*
Новые международные классификации эпилепсий и эпилептических приступов Международной Лиги по борьбе с эпилепсией. Журнал неврологии и психиатрии им. C.C. Корсакова. 2017. Т. 117. № 7. С. 99-106

Руководитель отдела
"Генетика предрасположенностей",
биолог, генетик-консультант

Дудурич
Василиса Валерьевна

– руководитель отдела "Генетика предрасположенностей", биолог, генетик-консультант

В 2010 г – PR-специалист, Дальневосточный институт международных отношений

В 2011 г. – Биолог, Дальневосточный Федеральный Университет

В 2012 г. – ФГБУН НИИ ФХМ ФМБФ России «Генодиагностика в современной медицине»

В 2012 г. – Учеба « Внедрение генетического тестирования в клинику широкого профиля»

В 2012 г. – Профессиональна подготовка «Пренатальная диагностика и генетический паспорт – основа профилактической медицины в век нанотехнологий» НИИ АГ им.Д.И.Отта СЗО РАМН

В 2013 г. – Профессиональна подготовка «Генетика в клинической гемостазиологии и гемореологии» НЦ ССХ им.Бакулева

В 2015 г. – Профессиональна подготовка в рамках VII съезда Российского общества Медицинских генетиков

В 2016 г. – Школа анализа данных «NGS в медицинской практике» ФГБНУ «МГНЦ»

В 2016 г. – Стажировка «Генетическое консультирование» ФГБНУ «МГНЦ»

В 2016 г. – Принимала участие в Международном Конгрессе по Генетике Человека г.Киото, Япония

С 2013-2016 гг – Руководитель медико-генетического центра в г.Хабаровске

С 2015-2016 гг – преподаватель на кафедре "Биологии" в Дальневосточном Государственном Медицинском Университете

С 2016-2018 гг – Секретарь Хабаровского отделения Российского общества медицинских генетиков

В 2018г. – Принимала участие в семинаре "Репродуктивный потенциал России: версии и контрверсии" Сочи, Россия

Организатор школы-семинара «Эпоха генетики и биоинформатики: междисциплинарный подход в науке и практике» - 2013, 2014, 2015, 2016 гг.

Стаж работы генетиком консультантом – 7 лет

Учредитель Благотворительного фонда им.Царицы Александры в помощь детям с генетической патологией alixfond.ru

Сфера профессиональных интересов: миробиом, мультифакториальная патологая, фармакогенетика, нутригенетика, репродуктивная генетика, эпигенетика.

Руководитель направления
"Пренатальная диагностика"

Киевская
Юлия Кирилловна

В 2011 году Окончила Московский Государственный Медико-Стоматологический Университет им. А.И. Евдокимова по специальности «Лечебное дело» Обучалась в ординатуре на кафедре Медицинской генетики того же университета по специальности «Генетика»

В 2015 году окончила интернатуру по специальности Акушерство и Гинекология в Медицинском институте усовершенствования врачей ФГБОУ ВПО «МГУПП»

С 2013 года ведет консультативный прием в ГБУЗ «Центр Планирования Семьи и Репродукции» ДЗМ

С 2017 года является руководителем направления «Пренатальная Диагностика» лаборатории Геномед

Регулярно выступает с докладами на конференциях и семинарах. Читает лекции для врачей различных специальной в области репродуции и пренатальной диагностики

Проводит медико-генетическое консультирование беременных по вопросам пренатальной диагностики с целью предупреждения рождения детей с врождёнными пороками развития, а так же семей с предположительно наследственной или врожденной патологией. Проводит интерпретацию полученных результатов ДНК-диагностики.

СПЕЦИАЛИСТЫ

Латыпов
Артур Шамилевич

Латыпов Артур Шамилевич – врач генетик высшей квалификационной категории.

После окончания в 1976 году лечебного факультета Казанского государственного медицинского института в течение многих работал сначала врачом кабинета медицинской генетики, затем заведующим медико-генетическим центром Республиканской больницы Татарстана, главным специалистом министерства здравоохранения Республики Татарстан, преподавателем кафедр Казанского медуниверситета.

Автор более 20 научных работ по проблемам репродукционной и биохимической генетики, участник многих отечественных и международных съездов и конференций по проблемам медицинской генетики. Внедрил в практическую работу центра методы массового скрининга беременных и новорожденных на наследственные заболевания, провел тысячи инвазивных процедур при подозрении на наследственные заболевания плода на разных сроках беременности.

С 2012 года работает на кафедре медицинской генетики с курсом пренатальной диагностики Российской академии последипломного образования.

Область научных интересов – метаболические болезни у детей, дородовая диагностика.

Время приема: СР 12-15, СБ 10-14

Прием врачей осуществляется по предварительной записи.

Врач-генетик

Габелко
Денис Игоревич

В 2009 году закончил лечебный факультет КГМУ им. С. В. Курашова (специальность «Лечебное дело»).

Интернатура в Санкт-Петербургской медицинской академии последипломного образования Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию (специальность «Генетика»).

Интернатура по терапии. Первичная переподготовка по специальности «Ультразвуковая диагностика». С 2016 года является сотрудником кафедры кафедры фундаментальных основ клинической медицины института фундаментальной медицины и биологии.

Сфера профессиональных интересов: пренатальная диагностика, применение современных скрининговых и диагностических методов для выявления генетической патологии плода. Определение риска повторного возникновения наследственных болезней в семье.

Участник научно-практических конференций по генетике и акушерству и гинекологии.

Стаж работы 5 лет.

Консультация по предварительной записи

Прием врачей осуществляется по предварительной записи.

Врач-генетик

Гришина
Кристина Александровна

Окончила в 2015 году Московский Государственный Медико-Стоматологический Университет по специальности «Лечебное дело». В том же году поступила в ординатуру по специальности 30.08.30 «Генетика» в ФГБНУ «Медико-генетический научный центр».
Принята на работу в лабораторию молекулярной генетики сложно наследуемых заболеваний (заведующий – д.б.н. Карпухин А.В.) в марте 2015 года на должность лаборанта-исследователя. С сентября 2015 года переведена на должность научного сотрудника. Является автором и соавтором более 10 статей и тезисов по клинической генетике, онкогенетике и молекулярной онкологии в российских и зарубежных журналах. Постоянный участник конференций по медицинской генетике.

Область научно-практических интересов: медико-генетическое консультирование больных с наследственной синдромальной и мультифакториальной патологией.

Консультация врача-генетика позволяет ответить на вопросы:

являются ли симптомы у ребенка признаками наследственного заболевания какое исследование необходимо для выявления причины определение точного прогноза рекомендации по проведению и оценка результатов пренатальной диагностики все, что нужно знать при планировании семьи консультация при планировании ЭКО выездные и онлайн консультации

Врач-генетик

Горгишели
Кетеван Важаевна

Является выпускницей медико-биологического факультета Российского Национального Исследовательского Медицинского Университета имени Н.И. Пирогова 2015 года, защитила дипломную работу на тему «Клинико-морфологическая корреляция витальных показателей состояния организма и морфофункциональных характеристик мононуклеаров крови при тяжелых отравлениях». Окончила клиническую ординатуру по специальности «Генетика» на кафедре молекулярной и клеточной генетики вышеупомянутого университета.

ринимала участие в научно-практической школе "Инновационные генетические технологии для врачей: применение в клинической практике", конференции Европейского общества генетики человека (ESHG) и других конференциях, посвященных генетике человека.

Проводит медико-генетическое консультирование семей с предположительно наследственной или врожденной патологией, включая моногенные заболевания и хромосомные аномалии, определяет показания к проведению лабораторных генетических исследований, проводит интерпретацию полученных результатов ДНК-диагностики. Консультирует беременных по вопросам пренатальной диагностики с целью предупреждения рождения детей с врождёнными пороками развития.

Врач-генетик, врач акушер-гинеколог, кандидат медицинских наук

Кудрявцева
Елена Владимировна

Врач-генетик, врач акушер-гинеколог, кандидат медицинских наук.

Специалист в области репродуктивного консультирования и наследственной патологии.

Окончила Уральскую государственную медицинскую академию в 2005 году.

Ординатура по специальности «Акушерство и гинекология»

Интернатура по специальности «Генетика»

Профессиональная переподготовка по специальности «Ультразвуковая диагностика»

Направления деятельности:

Бесплодие и невынашивание беременности

Является выпускницей Нижегородской государственной медицинской академии, лечебного факультета (специальность «Лечебное дело»). Окончила клиническую ординатуру ФБГНУ «МГНЦ» по специальности «Генетика». В 2014 году проходила стажировку в клинике материнства и детства (IRCCS materno infantile Burlo Garofolo, Trieste, Italy).

С 2016 года работает на должности врача-консультанта в ООО «Геномед».

Регулярно участвует в научно-практических конференциях по генетике.

Основные направления деятельности: Консультирование по вопросам клинической и лабораторной диагностики генетических заболеваний и интерпретация результатов. Ведение пациентов и их семей с предположительно наследственной патологией. Консультирование при планировании беременности, а также при наступившей беременности по вопросам пренатальной диагностики с целью предупреждения рождения детей с врожденной патологией.

В период с 2013 г. по 2014 г. работала в должности младшего научного сотрудника лаборатории молекулярной онкологии Ростовского научно-исследовательского онкологического института.

В 2013 г. - повышение квалификации «Актуальные вопросы клинической генетики», ГБОУ ВПО Рост ГМУ Минздрава России.

В 2014 г. - повышение квалификации «Применение метода ПЦР в реальном времени для генодиагностики соматических мутаций», ФБУН «Центральный научно-исследовательский институт эпидемиологии Роспотребнадзора».

С 2014 г. – врач-генетик лаборатории медицинской генетики Ростовского государственного медицинского университета.

В 2015 г. успешно подтвердила квалификацию «Medical Laboratory Scientist». Является действующим членом «Australian Institute of Medical Scientist».

В 2017 г. - повышение квалификации «Интерпретация результатов Генетических исследований у больных с наследственными заболеваниями», НОЧУДПО «Учебный центр по непрерывному медицинскому и фармацевтическому образованию»; «Актуальные вопросы клинической лабораторной диагностики и лабораторной генетики», ФБОУ ВО РостГМУ Минздрава России; повышение квалификации «BRCA Liverpool Genetic Counselling Course», Liverpool University.

Регулярно участвует в научных конференциях, является автором и соавтором более 20 научных публикаций в отечественных и зарубежных изданиях.

Основное направление деятельности: клинико-лабораторная интерпретация результатов ДНК-диагностики, хромосомного микроматричного анализа, NGS.

Сфера интересов: применение в клинической практике новейших полногеномных методов диагностики, онкогенетика.